MicroRNA-155對(duì)乳腺癌細(xì)胞株MDA-MB-231增殖和遷移的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的與背景:
　　 MicroRNAs(miRNAs)是廣泛存在于真核生物中的，長(zhǎng)約為19-24個(gè)核苷酸，非編碼的一類單鏈小分子RNA。在個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞增殖分化、凋亡、遷移侵襲、血管生成、腫瘤形成等過程具有重要的調(diào)控作用。MiRNAs通過與其靶基因的3'UTR區(qū)不完全互補(bǔ)配對(duì)抑制靶基因的翻譯，或者完全配對(duì)直接降解靶基因的mRNA。乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈明顯的上升趨勢(shì)。已有報(bào)道證明MiRNA-155與乳腺

2、癌的發(fā)生發(fā)展有著密切關(guān)系，但是它的具體作用機(jī)制仍未完全清楚。本研究將繼續(xù)探討miRNA-155在乳腺癌細(xì)胞中的功能和作用機(jī)制問題，希望為乳腺癌的診斷和治療提供理論基礎(chǔ)。
　　 材料和方法:
　　 (1)轉(zhuǎn)染技術(shù):采用脂質(zhì)體Lipofectamine2000介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染技術(shù)，將miRNA-155mimics和miRNA-155 inhibitor轉(zhuǎn)染入乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231中，并用Real-time PCR證實(shí)轉(zhuǎn)染后

3、前后miRNA-155的表達(dá)情況。
　　 (2) MTS法:應(yīng)用MTS法檢測(cè)轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics和miRNA-155 inhibitor后，乳腺癌細(xì)胞增殖能力的改變.
　　 (3)平板克隆形成實(shí)驗(yàn):將miRNA-155 mimics和miRNA-155 inhibitor轉(zhuǎn)染到乳腺癌細(xì)胞中，連續(xù)培養(yǎng)7天，觀察乳腺癌細(xì)胞克隆形成能力的改變;
　　 (4) Transwell遷移試驗(yàn)和細(xì)胞劃痕試驗(yàn):觀

4、察轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics和miRNA-155 inhibitor后的細(xì)胞遷移能力的改變。
　　 (5) Real-time PCR測(cè)mRNA水平的表達(dá):轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics和miRNA-155inhibitor48h后用Real-time PCR檢測(cè)mRNA水平的表達(dá)改變情況。
　　 (6) Western blot:檢測(cè)轉(zhuǎn)染后靶蛋白SOCS1及遷移相關(guān)蛋白刪P16表達(dá)水平的改變。
　

5、　 結(jié)果:
　　 (1) Real-time PCR結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染后水平:實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics的miRNA-155表達(dá)量較NC組明顯增加，轉(zhuǎn)染miRNA-155 inhibitor較對(duì)照組顯著降低（P均＜0.05）。
　　 (2) MTS法檢測(cè)結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics較NC組，增殖能力受到明顯的增強(qiáng)，轉(zhuǎn)染miRNA-155 inhibitor較對(duì)照組顯著降低(P均＜0.0

6、5)。
　　 (3)平板克隆實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:實(shí)驗(yàn)組轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics較NC組，克隆形成能力顯著增強(qiáng)，轉(zhuǎn)染miRNA-155 inhibitor較對(duì)照組顯著降低(P均＜0.05)
　　 (4)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)顯示:轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics的乳腺癌細(xì)胞與轉(zhuǎn)染NC的對(duì)照組細(xì)胞相比，其橫向遷移能力受到顯著增強(qiáng)，轉(zhuǎn)染miRNA-155 inhibitor較對(duì)照組顯著降低。
　　 (5) Transw

7、ell移行實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics的乳腺癌細(xì)胞與轉(zhuǎn)染NC的對(duì)照組細(xì)胞相比，其穿膜數(shù)受到顯著增加，轉(zhuǎn)染miRNA-155inhibitor較對(duì)照組顯著降低（P均＜0.05）。
　　 (6) mRNA水平檢測(cè)結(jié)果顯示:轉(zhuǎn)染了miRNA-155 mimics的乳腺癌細(xì)胞與轉(zhuǎn)染NC的對(duì)照組細(xì)胞相比，其MMP16的mRNA表達(dá)量增高，轉(zhuǎn)染miRNA-155inhibitor較對(duì)照組顯著降低（P均＜0.05）。

8、r>　　 (7) Western blot結(jié)果顯示:乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231在轉(zhuǎn)染miRNA-155 mimics后，其靶蛋白SOCS1表達(dá)水平被顯著下調(diào)，遷移相關(guān)蛋白MMP16上調(diào)。而轉(zhuǎn)染了miRNA-155 inhibitor后，SOCS1蛋白表達(dá)水平上調(diào)，MMP16下調(diào)。
　　 結(jié)論:
　　 結(jié)果顯示miRNA-155對(duì)乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231的增殖能力和遷移能力顯著增強(qiáng);于是我們認(rèn)為miRNA-15