人參皂苷Rb1對(duì)大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、根據(jù)國(guó)際衛(wèi)生組織預(yù)測(cè)，到2020年，冠心病將成為人類(lèi)的主要?dú)⑹?。如何干預(yù)心肌缺血引發(fā)的心肌梗死及保護(hù)心臟愈來(lái)愈受到全球重視。而最有效挽救心肌梗塞的方法是盡快恢復(fù)缺血心肌的血流，即再灌注。目前，常采用溶栓療法、經(jīng)皮腔內(nèi)冠脈血管成型術(shù)等干預(yù)手段。然而，再灌注是一把雙刃劍，他本身可造成致命的損傷，即再灌注損傷。探索防治心肌缺血/再灌注損傷的藥物已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。 目前已知的保護(hù)心臟，減少心肌缺血/再灌注損傷最有力的方法是缺血預(yù)適應(yīng)

2、。但因倫理道德及使用不便等原因限制其臨床運(yùn)用。隨著對(duì)缺血預(yù)適應(yīng)本質(zhì)、特點(diǎn)和作用機(jī)理的不斷深入認(rèn)識(shí)和研究，人們期望用藥物代替缺血刺激，促使機(jī)體釋放生物活性物質(zhì)或直接激活機(jī)體保護(hù)機(jī)制而產(chǎn)生心臟對(duì)缺血、缺氧的耐受。我國(guó)中藥資源極為豐富，從中尋找防治缺血/再灌注損傷安全有效的藥物，特別是對(duì)其有效成分進(jìn)行藥效學(xué)及作用機(jī)制的研究，對(duì)于開(kāi)發(fā)我國(guó)的植物資源和促進(jìn)我國(guó)中藥現(xiàn)代化具有重要意義。 人參應(yīng)用于中醫(yī)臨床已有兩千多年的歷史，具有廣泛的藥理作

3、用和醫(yī)療用途，用于增強(qiáng)精力，對(duì)抗各種生理應(yīng)激。人參皂甙是人參的主要活性成分。最近，40多種人參皂甙被分離和鑒定。其中人參皂苷Rb1在人參含量最高，并具有多種藥理活性。例如，人參皂苷Rb1可清除氧自由基，抑制鈣過(guò)度內(nèi)流，改善能量代謝等。研究證明人參皂苷Rb1對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)均有保護(hù)作用，但具體機(jī)制仍未清楚，值得我們進(jìn)一步的深入探討。 本文采用結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支的心肌缺血/再灌注損傷模型，通過(guò)研究心肌梗死面積，血清酶學(xué)變化

4、和心肌細(xì)胞凋亡，觀察人參皂苷Rb1對(duì)心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用。并從氧化應(yīng)激，信號(hào)通路等變化，分析其可能的作用機(jī)制，進(jìn)一步為人參皂苷Rb1的開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。 本研究分三部分。 一、人參皂苷Rb1對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用 目的:本實(shí)驗(yàn)將通過(guò)經(jīng)典的心肌缺血/再灌注損傷模型，觀察人參皂苷Rb1對(duì)心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用，并從心肌梗死面積、氧化應(yīng)激和心肌細(xì)胞凋亡三個(gè)層面初步探討人參皂苷Rb1抗

5、心肌缺血/再灌注損傷的作用機(jī)制。 方法: 1、心肌缺血/再灌注動(dòng)物模型的建立結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈前降支產(chǎn)生心肌缺血/再灌注損傷模型。 2、動(dòng)物分組及實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)SD大鼠隨機(jī)分成3組：Sham組(n=9，假手術(shù)，只穿線，不結(jié)扎)，I/R組(n=9，單純?nèi)毖俟嘧?，Rb1組(n=9，人參皂苷Rb1預(yù)處理+缺血再灌注，左冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎前10min靜脈注入人參皂苷Rb140mg/kg)，除S組外，所有大鼠心臟都經(jīng)歷45mi

6、n缺血和120min再灌注。觀察心肌梗死面積。另外3組(n=9)，其余同上，觀察心肌細(xì)胞凋亡和病理學(xué)變化。另外3組(n=9)，其余同上，檢測(cè)氧化應(yīng)激和部分凋亡指標(biāo)。 3.觀察血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)，心肌梗死面積，血清酶學(xué)變化，心肌細(xì)胞凋亡，心肌SOD活力、MDA含量。 4.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn)，結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(x±sE)表示，p<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的差異。 小結(jié):

7、 本部分以SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，運(yùn)用冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎心肌缺血/再灌注損傷模型。通過(guò)檢測(cè)血流動(dòng)力學(xué)、心肌梗死面積、心肌酶、組織病理學(xué)、氧化應(yīng)激及心肌細(xì)胞凋亡相關(guān)指標(biāo)的變化證實(shí)了人參皂苷Rb1預(yù)處理具有抗心肌缺血/再灌注損傷的保護(hù)作用。這種作用可能與人參皂苷Rb1的抗氧化應(yīng)激及抗心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制密切相關(guān)。 二、P13K/Akt通路在人參皂苷Rb1對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注損傷保護(hù)中的作用 目的:在第一部分實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，

8、實(shí)驗(yàn)擬利用冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎心肌缺血/再灌注損傷的大鼠模型及P13K抑制劑，通過(guò)檢測(cè)心肌梗死面積和Akt的蛋白表達(dá)來(lái)探討P13K/AKT信號(hào)通路是否參與人參皂苷Rb1預(yù)處理的心肌保護(hù)作用。 三、一氧化氮在人參皂苷Rb1對(duì)大鼠心肌缺血/再灌注損傷保護(hù)中的作用 目的:在第一部分和第二部分的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，本實(shí)驗(yàn)擬利用冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎心肌缺血/再灌注損傷的大鼠模型及NOS抑制劑，通過(guò)檢測(cè)心肌梗死面積，P-eNOS的蛋白表達(dá)和心肌

9、組織NO含量來(lái)探討NO是否參與人參皂苷Rb1預(yù)處理的心肌保護(hù)作用。 結(jié)論 1.在本實(shí)驗(yàn)的冠狀動(dòng)脈前降支結(jié)扎心肌缺血/再灌注損傷模型中，心肌細(xì)胞存在明顯的氧化應(yīng)激，壞死和凋亡的發(fā)生。 2.人參皂苷Rb1預(yù)處理可明顯抑制心肌缺血/再灌注損傷誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激，降低心肌梗死面積和心肌酶的釋放。 3.人參皂苷Rb1預(yù)處理抗心肌缺血/再灌注損傷的可能機(jī)制是通過(guò)增強(qiáng)細(xì)胞內(nèi)源性抗氧自由基系統(tǒng)的功能，減少氧自由基的產(chǎn)生，抑制

10、心肌細(xì)胞凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)的。 4.人參皂苷Rb1預(yù)處理具有抑制細(xì)胞凋亡作用。easpase-3參與了本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭械募?xì)胞凋亡，人參皂苷Rb1預(yù)處理可通過(guò)抑制細(xì)胞凋亡的關(guān)鍵酶Caspase-3的活性發(fā)揮抗凋亡作用。 5.特異性的PI3K阻斷劑，wortmannin明顯抑制了人參皂苷Rb1預(yù)處理誘導(dǎo)磷酸化AKT表達(dá)的增加和對(duì)心肌的保護(hù)。提示人參皂苷Rb1預(yù)處理可能通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路發(fā)揮抗心肌缺血/再灌注損傷的作用。