同基因骨髓造血干細(xì)胞移植免疫重建誘導(dǎo)小鼠皮膚移植免疫耐受的初步研究.pdf

1、目的:
　　 探討小鼠異基因皮膚移植后接受清髓性預(yù)處理,通過受體同基因骨髓造血干細(xì)胞移植重建免疫系統(tǒng)誘導(dǎo)皮膚移植物免疫耐受的可行性。
　　 方法:
　　 1、建立皮膚移植模型:受體雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為2組,A:同基因移植組,BALB/c-BALB/c;B:異基因移植組,C57BL/6-BALB/c。通過觀察移植皮膚形態(tài)變化及成活時(shí)間驗(yàn)證皮膚移植模型的可靠性。
　　 2、建立免疫重建模型:受體雌性B

2、ALB/c小鼠隨機(jī)分為3組,A:空白對照組;B:全身照射(TBI)組;C:TBD-骨髓移植(BMT)組。受體小鼠接受致死劑量直線加速器射線全身照射,TBI后4～6小時(shí)內(nèi)經(jīng)尾靜脈注射供體雄性BALB/c小鼠骨髓細(xì)胞。通過觀察TBI后各組小鼠一般情況變化和存活時(shí)間,檢測外周血白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù),脾細(xì)胞對刀豆蛋白A(ConA)的增殖反應(yīng)能力,PCR檢測受體內(nèi)性別決定基因Sry基因初步檢測免疫重建水平。
　　 3、同基因骨髓造血干細(xì)胞移

3、植免疫重建誘導(dǎo)皮膚移植免疫耐受:受體雌性BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組,A:移植對照組;B:環(huán)孢霉素A(CsA)組;C:CsA+TBI組;D:CsA+TBI+BMT組。受體BALB/c小鼠接受供體C57BL/6小鼠皮肽移植,皮膚移植當(dāng)天至術(shù)后第7天每天腹腔注射CsA,第8天接受致死劑量的直線加速器射線個(gè)身照射,4～6小時(shí)內(nèi)通過尾靜脈注射受體同基順骨髓細(xì)胞。通過記錄皮膚移植物存活時(shí)間、觀察皮膚移植物HE染色組織學(xué)改變、單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(

4、MLR)檢測免疫耐受的效應(yīng);TBI后記錄小鼠生存率及外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測免疫重建情況。
　　 結(jié)果:
　　 1、同基因移植組,除1例皮膚移植物因抓咬死亡,其余存活良好;異基因移植組,除1例皮膚移植物在術(shù)后7天因皮下淤血死亡,其余在9～14天內(nèi)因排斥反應(yīng)死亡,兩組手術(shù)成功率為93.33%。
　　 2、B組小鼠在TBI后12天內(nèi)全部死亡,而C組小鼠除1只于TBI后第6天死亡,其余長期存活,其白細(xì)胞數(shù)與血小板數(shù)在TBI

5、后第7天均降到最低,之后持續(xù)性增高,第21天時(shí)白細(xì)胞數(shù)與A組比較無顯著差異(P＞0.05),而血小板數(shù)達(dá)到正常值水平;第21天時(shí)C組淋巴細(xì)胞對ConA增值反應(yīng)能力與A組比較無顯著差異(P＞0.05);第28天時(shí)C組體內(nèi)均能檢測到Sry基因。
　　 3、存活時(shí)間:A、B組未接受TBI均存活良好,C組小鼠在TBI后6～10天內(nèi)全部死亡,而D組小鼠在觀察期間存活良好;外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù):C組白細(xì)胞數(shù)呈持續(xù)性降低直到全部死亡,D組于TBI

6、后第6天時(shí)降至最低點(diǎn),之后持續(xù)上升,于第18天達(dá)到B組水平;皮膚成活時(shí)間:D組移植皮膚平均存活時(shí)間為34.9天,顯著長于各對照組(P＜0.01);病理學(xué)結(jié)果:B組移植皮片有大量淋巴細(xì)胞浸潤,組織結(jié)構(gòu)不清,C、D組未見明顯急性排斥反應(yīng),淋巴細(xì)胞浸潤較少,組織結(jié)構(gòu)清晰;混合淋巴細(xì)胞反應(yīng):D組小鼠脾細(xì)胞對供體小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著降低,而對第三方小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)與A組和B組比較無顯著差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論: