重型再生障礙性貧血患者樹突細(xì)胞數(shù)量與功能的研究.pdf

1、目的：研究重型再生障礙性貧血（SAA）患者樹突細(xì)胞（DCs）數(shù)量和功能，探討DCs及其對輔助性T淋巴細(xì)胞（Th）調(diào)控在SAA發(fā)病中的作用，闡述SAA的免疫發(fā)病機(jī)制。 方法：研究對象為新發(fā)病的SAA患者（發(fā)病組）26例、經(jīng)免疫抑制治療達(dá)緩解或基本治愈的患者（恢復(fù)組）9例及正常對照16例。流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血mDCs（HLA-DR+Lin-CD11c+細(xì)胞）、pDCs（HLA-DR+Lin-CD123+細(xì)胞）數(shù)量。RT-PCR檢測外

2、周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMNC）共刺激分子CD80、CD86 mRNA表達(dá)。體外以rhGM-CSF和rhIL-4誘導(dǎo)骨髓單核細(xì)胞來源的mDCs，與異體淋巴細(xì)胞做混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)（MLR），MTT比色法檢測淋巴細(xì)胞增殖率，ELISA檢測MLR上清IL-12、IFNγ水平，分析淋巴細(xì)胞增殖率與IL-12、IFNγ水平的相關(guān)性。RT-PCR檢測PBMNC轉(zhuǎn)錄因子T-bet、GATA3 mRNA表達(dá)，ELISA檢測血漿IFNγ、IL-4水平，分析T

3、-bet mRNA表達(dá)與mDCs/pDCs比值、血漿IFNγ水平的相關(guān)性。 結(jié)果： 1.SAA發(fā)病、恢復(fù)組mDCs占PBMNC的比例分別為（0.44±0.25）%、（0.68±0.31）%，明顯高于正常對照組[（0.29±0.10）%]（P<0.05，P<0.01）。三組pDCs占PBMNC分別為（0.20±0.20）%、（0.26±0.20）%、（0.29±0.13）%，三組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。SAA發(fā)

4、病組和恢復(fù)組mDCs/pDCs比值分別為3.25±2.70和2.95±0.86，明顯高于對照組（1.15±0.56，P<0.01，P<0.05）。盡管SAA恢復(fù)組mDCs高于發(fā)病組，但兩組間mDCs/pDCs比值差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 2.發(fā)病組、恢復(fù)組、對照組PBMNC CD80、CD86 mRNA陽性表達(dá)率分別為88.4%、100%和68.8%。三組CD86 mRNA相對表達(dá)量分別為（1.42±0.16）、（1.

5、06±0.12）和（1.10±0.07），發(fā)病組明顯高于恢復(fù)組和正常對照組（P<0.05）。三組CD80 mRNA相對表達(dá)量分別為（1.10±0.14）、（1.07±0.12）和（1.01±0.15），三組間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。 3.當(dāng)mDCs與淋巴細(xì)胞1：50接種時(shí)，發(fā)病組淋巴細(xì)胞增殖率為（322.13±171.07）%，明顯高于恢復(fù)組[（180.90±79.12）%]和對照組[（192.25±91.93）%

6、]（P<0.05），恢復(fù)組和對照組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。8例恢復(fù)期患者與4例正常對照DCs分別與正常淋巴細(xì)胞按1：100、1：50、1：20及1：10混合培養(yǎng)時(shí)，淋巴細(xì)胞增殖率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。比較不同來源的刺激細(xì)胞（mDCs）和淋巴細(xì)胞按1：50混合培養(yǎng)后的淋巴細(xì)胞增殖率，4組兩兩比較后發(fā)現(xiàn)僅發(fā)病患者-正常組與正常-正常組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），其余各組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

7、mDCs與淋巴細(xì)胞比例為1：50培養(yǎng)時(shí)，發(fā)病組培養(yǎng)上清IL-12、IFNγ高于恢復(fù)組和對照組（P<0.05），恢復(fù)組與對照組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。MLR上清液IL-12水平、IFNγ水平與淋巴細(xì)胞增殖率均呈正相關(guān)（r=0.529，P=0.001； r=0.381，P=0.024）。 4.發(fā)病組、恢復(fù)組及對照組PBMNC T-bet mRNA相對表達(dá)量分別為0.37±0.07、0.20±0.07、0.17±0.05

8、，發(fā)病組明顯高于恢復(fù)組和對照組（P<0.05）。三組中GATA3 mRNA相對表達(dá)量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。發(fā)病組T-bet/GATA3比值為0.72±0.13，明顯高于恢復(fù)組（0.33±0.08）和對照組（0.35±0.11）（P<0.05）。SAA發(fā)病組患者血漿IFNγ水平[（50.9±1.1）pg/ml]顯著高于恢復(fù)組患者[（49.7±0.9）pg/ml]與正常對照[（49.7±0.7）pg/ml]（P<0.05）。T-

9、bet mRNA表達(dá)與mDCs/pDCs比值呈顯著正相關(guān)（r=0.445，P<0.01），與血漿IFN±水平呈顯著正相關(guān)（r=0.402，P<0.01）。 結(jié)論： 1.SAA發(fā)病期患者外周血mDCs比例增高，mDCs/pDCs比值失衡，雖然恢復(fù)期患者血象基本恢復(fù)，但mDCs比例和mDCs/pDCs比值仍高于正常對照組，因此臨床治療SAA不可過早停用免疫抑制劑，mDCs/pDCs比值可作為決定是否停藥的一個(gè)指標(biāo)。

10、2.SAA發(fā)病患者PBMNC CD86 mRNA表達(dá)升高，骨髓單核細(xì)胞來源的mDCs刺激異體淋巴細(xì)胞增殖功能增強(qiáng)。淋巴細(xì)胞增殖率與培養(yǎng)液上清IL-12、IFNγ水平呈正相關(guān)，提示SAA發(fā)病期患者DCs功能增強(qiáng)。 3.SAA發(fā)病患者PBMNC的與1110細(xì)胞向Th1細(xì)胞極化有關(guān)的轉(zhuǎn)錄因子T-bet mRNA表達(dá)升高，且相對表達(dá)量與mDCs/pDCs比值、血漿IFNγ水平呈正相關(guān)，證實(shí)SAA為Th1型AID。血漿Ⅰ型淋巴因子水平升高