沙眼衣原體E型DNA疫苗免疫效應(yīng)的研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydia trachomatis C.t)所致的非淋球菌性尿道炎(non-gonococcal urethritis，NGu)是最常見的性傳播疾病(STD，sexuallytransmitted diseases)。其感染所引起的的前列腺炎、不孕不育、異位妊娠、慢性盆腔炎等嚴(yán)重危害著患者的身心健康。對(duì)C.t感染的研究已成為當(dāng)今國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)之一，C.t的預(yù)防和控制方法亟待改進(jìn)。沙眼衣原體疫苗的研究便是預(yù)防措施中的

2、重點(diǎn)之一。在眾多研究的C.t疫苗中，DNA疫苗憑借其不可比擬的優(yōu)勢(shì)成為發(fā)展的方向。遺憾的是到目前為止仍然沒有成功的疫苗問世。 目的：研究感染泌尿生殖道的C,t優(yōu)勢(shì)型-E型的DNA疫苗在小鼠體內(nèi)誘發(fā)的免疫應(yīng)答和免疫保護(hù)作用。 方法：本研究以沙眼衣原體(C.t)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)為基礎(chǔ)，將C.t E血清型在McCoy細(xì)胞中培養(yǎng)，并經(jīng)過連續(xù)傳代使C.t增量。以4～5周齡BALB/c小鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，將小鼠分為接種空質(zhì)粒的陰性對(duì)照組、D

3、NA疫苗單獨(dú)免疫組和接種滅活C.t E型原體的陽性對(duì)照組。分別于第0、2、4周雙側(cè)股四頭肌肌肉接種，實(shí)驗(yàn)組接種本實(shí)驗(yàn)室所構(gòu)建的DNA疫苗免疫，陰性對(duì)照組小鼠接種空質(zhì)粒，陽性對(duì)照組接種滅活C.t E型原體同時(shí)輔以完全弗氏佐劑與不完全弗氏佐劑。第6周采集小鼠血清和生殖道分泌物沖洗液以檢測(cè)血清和局部C.t特異性抗體、細(xì)胞因子、抗體中和試驗(yàn)；同時(shí)對(duì)部分小鼠進(jìn)行遲發(fā)型超敏反應(yīng)實(shí)驗(yàn)并處死采集其脾臟以完成脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)。剩余部分右股部肌肉注射黃體

4、酮以增強(qiáng)小鼠對(duì)C.t感染的敏感性。第7周用C.t E型原體從生殖道感染小鼠。第8周采集小鼠生殖道脫落細(xì)胞并進(jìn)行小鼠生殖道C.t的免疫熒光檢測(cè)與培養(yǎng)和計(jì)數(shù)。第9周取小鼠靜脈血、生殖道分泌物沖洗液、脾淋巴細(xì)胞和小鼠完整子宮標(biāo)本，檢測(cè)其抗體、細(xì)胞因子、脾淋巴細(xì)胞增殖情況及宮頸組織病理，從而研究所構(gòu)建的C.t E型DNA疫苗的免疫效應(yīng)。 結(jié)果： (1)C.t E型株成功培養(yǎng)并定量，結(jié)果顯示，所有的孔板90％以上細(xì)胞感染，收集6孔

5、板的C.t懸液，高速離心后得到的C.t EB懸液其濃度為2.1750×10<'7>IFU/mlIFU/mL，考馬斯亮藍(lán)法進(jìn)行C.t EB蛋白定量顯示蛋白濃度為3081.7μg/ml。 (2)生殖道C．tEB的攻擊前后，檢測(cè)血清抗體、細(xì)胞因子IFN-γ、抗體中和試驗(yàn)、小鼠進(jìn)行遲發(fā)型超敏反應(yīng)及脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)示所構(gòu)建的C.tE型DNA疫苗單獨(dú)免疫小鼠能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生一定的C.t特異性細(xì)胞免疫和體液免疫。 (3)生殖道分泌物衣原

6、體免疫熒光測(cè)定、小鼠生殖道C.t培養(yǎng)和計(jì)數(shù)、組織病理活檢示陰性對(duì)照組小鼠感染C.t，而陽性對(duì)照組與實(shí)驗(yàn)組未感染。 結(jié)論： (1)所構(gòu)建的C.t E型DNA疫苗單獨(dú)免疫小鼠能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生一定的C.t特異性細(xì)胞免疫和體液免疫。 (2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針對(duì)C.tompl基因所編碼的主要外膜蛋白(major outer membrane protein，MOMP)產(chǎn)生的抗體是保護(hù)性抗體，具有中和能力。 (3)構(gòu)建的C.t