養(yǎng)殖刺參“腐皮綜合征”致病菌的鑒定及其滅活菌苗對刺參免疫作用的研究.pdf

1、刺參(Apostichopus　japonicus，又稱仿刺參)，屬棘皮動物門(Echinodemata)、海參綱(Holothuroidea)、仿刺參屬(Apostichopus)，主要分布于中國黃渤海、俄羅斯東部海岸、日本和韓國沿岸，是海參種類中食用和藥用價值最高的品種。近年來，我國大力發(fā)展刺參養(yǎng)殖業(yè)，使其一躍成為中國北方沿海水產養(yǎng)殖的重要新興產業(yè)，取得了顯著的經濟效益和社會效益。僅山東省2007年刺參養(yǎng)殖面積達45萬畝，年產量7～

2、8萬噸，經濟產值達到百億元，刺參成為當前中國海水養(yǎng)殖業(yè)中產值最大的養(yǎng)殖品種之一。然而，由于養(yǎng)殖的過速發(fā)展和不規(guī)范運作，刺參病害問題日趨突出，出現(xiàn)了多種明顯病癥和大規(guī)模死亡現(xiàn)象。其中，越冬保苗期和養(yǎng)成期出現(xiàn)的“腐皮綜合征”是目前養(yǎng)殖刺參危害最為嚴重的疾病，給廣大刺參養(yǎng)殖業(yè)者造成了嚴重的經濟損失，也嚴重制約了該產業(yè)的持續(xù)穩(wěn)定發(fā)展。 多年來，人們主要采用抗生素對其病癥進行預防和治療，但抗生素的大量使用會造成耐藥性的產生，使疾病的治愈難

3、度越來越大。同時，也可能產生藥物殘留影響產品質量。由此可見，提高刺參自身的免疫力，增強其抗病力是解決刺參病害問題的重要途徑。因此，在水產養(yǎng)殖疾病防治方面，利用外源刺激物(免疫增強劑、疫苗等)有效地提高養(yǎng)殖對象本身的免疫力顯得非常重要。迄今為止，有關滅活菌苗對刺參免疫影響的研究較少見。 2007年6～7月，對煙臺三家養(yǎng)殖場患“腐皮綜合征”養(yǎng)成期刺參進行了病原學研究，患病刺參主要癥狀厭食、搖頭、腫嘴、排臟、口部潰爛乃至體表大面積潰瘍

4、，出現(xiàn)大量死亡。從病灶部位分離得到了一種菌落形態(tài)一致的優(yōu)勢菌HS-yt，通過形態(tài)學、生理生化和16S rDNA分子生物學方法對其菌株進行的分類鑒定表明，HS-yt是氣單胞菌屬(Aeromonas sp.)的一種，與Aeromonas veronii相似性最大。通過人工感染試驗證實其為刺參“腐皮綜合征”的致病原。 本文首先從預設的5個常用的評價免疫增強劑對無脊椎動物免疫作用的酶活力指標中篩選出3個變化有規(guī)律的指標。結果表明溶菌酶、

5、超氧化物歧化酶及堿性磷酸酶為變化較規(guī)律的3個指標，并將其作為進一步試驗的免疫指標。 將致病菌HS-yt制備成甲醛滅活菌苗后對健康刺參進行體腔注射，測定了滅活氣單胞菌苗對刺參免疫指標的影響。結果表明，刺參血清中溶菌酶活力在注射菌苗后，3.9x108CFU/mL組于6h時活力就達到峰值，而4.7x107CFU/mL組的活力在24h時達到最高值，試驗組的溶菌酶活力明顯高于對照組(P<0.05)。在3.9x108CFU/mL組中，堿性磷

6、酸酶活力于48h時達到最高值；而4.7x107CFU/mL組在96h時達到最高值，試驗組的堿性磷酸酶活力明顯高于對照組(P<0.05)。相比之下，注射菌苗對血清的超氧化物歧化酶活力影響卻不顯著?？傮w上，該菌苗在一定程度上可以提高刺參的機體免疫力。實驗結果也證實，注射高濃度菌苗時，溶菌酶、堿性磷酸酶活力的達峰時間較短而且顯著，但其酶活力升高持續(xù)時間較短。 本研究中滅活氣單胞菌苗能夠顯著的提高刺參堿性磷酸酶和溶菌酶活力，顯示了該菌苗