乳酸菌發(fā)酵谷物提取物對腫瘤細胞的抑制作用研究.pdf

1、惡性腫瘤一直以來都是威脅人類健康和生命的主要疾病，如何預防腫瘤成為了我們面臨的一個重大挑戰(zhàn)。隨著近年來食源性天然抗腫瘤物質(zhì)的研究越來越多，更多的人把目光轉(zhuǎn)移到了飲食防癌上。因此，篩選出更高效、安全的食源性抗腫瘤天然產(chǎn)物具有了重要的意義。我國大麥資源豐富、營養(yǎng)全面，富含多種生物活性組分，是谷物中的全價營養(yǎng)食物。利用微生物轉(zhuǎn)化，能夠更多、更有效地獲得大麥中的抗腫瘤活性成分，為食源性天然抗腫瘤食品的開發(fā)提供試驗依據(jù)，同時也能為我國大麥資源的高

2、效利用提供新的思路。
　　本論文以大麥為原料，以乳酸菌為發(fā)酵菌株，篩選并制備乳酸菌發(fā)酵大麥提取物(LFBE)，通過測定發(fā)酵過程中主要成分的變化探究LFBE抗腫瘤活性的物質(zhì)基礎(chǔ)，通過體外細胞試驗研究LFBE對腫瘤細胞的抑制作用，并對其抗腫瘤機制進行初步探討。主要研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.通過MTT法評價發(fā)酵提取物的抗腫瘤活性，篩選出最佳的發(fā)酵組合。結(jié)果表明:乳酸菌發(fā)酵大麥提取物抗腫瘤活性顯著優(yōu)于其它谷物發(fā)酵提取物，在2mg

3、/mL時對腫瘤細胞的抑制率高達90.05％;從20株乳酸菌中篩選最適的發(fā)酵大麥菌株，初步選定已經(jīng)過鑒定、菌株安全性更高的植物乳桿菌(Lactobacillusplantarum Dy-1)為發(fā)酵菌株，其半抑制濃度(IC50)為0.73mg/mL。
　　2.研究比較了乳酸菌發(fā)酵4種大麥過程中主要成分的變化。參照國標等方法測定了發(fā)酵過程中蛋白質(zhì)、多酚、總糖的含量變化。結(jié)果表明:在0～48h發(fā)酵過程中，pH值逐漸降低，活菌數(shù)在12h達到

4、最高值，4種LFBE的蛋白質(zhì)含量先升后降，在36h達到峰值，多酚含量逐漸升高，總糖含量在12h達到最高值，隨后逐漸降低;其中揚飼麥3號在發(fā)酵過程中的乳酸菌活菌數(shù)、蛋白質(zhì)以及多酚含量均高于其它三種大麥，其在發(fā)酵后相對分子質(zhì)量在25～40kDa的蛋白質(zhì)含量有顯著增加。故選擇揚飼麥3號作進一步的細胞試驗和分離純化試驗。
　　3.研究了LFBE對人結(jié)腸癌HT-29細胞的抑制作用。通過SDS-PAGE法觀察發(fā)酵過程中蛋白質(zhì)分子量的變化情況，

5、采用CCK-8法和倒置熒光顯微鏡及掃描電鏡觀測細胞增殖能力與形態(tài)變化，通過Hoechst/PI雙染法研究細胞凋亡，并利用單細胞凝膠電泳檢測細胞的DNA損傷。結(jié)果表明:LFBE能夠顯著抑制腫瘤細胞的增殖，且具有時間-濃度依賴性。2mg/mL的LFBE分別處理細胞24 h、48 h、72 h后，其抑制率分別達到90.05％、93.34％和95.23％;LFBE能夠破壞細胞正常形態(tài)和結(jié)構(gòu)，使細胞皺縮變形，產(chǎn)生大量凋亡小體;同時LFBE的處理使