特異性卵黃抗體對(duì)燦爛弧菌感染仿刺參的保護(hù)作用研究.pdf

1、“腐皮綜合征”因其高感染率和高死亡率，被認(rèn)為是危害仿刺參養(yǎng)殖的最嚴(yán)重疾病之一。燦爛弧菌（Vibrio splendidus）是引起“腐皮綜合征”的主要致病菌之一，且感染范圍廣，致病性強(qiáng)。目前，對(duì)該病的防治主要依靠抗生素和化學(xué)藥物，但藥物的長(zhǎng)期大量使用甚至濫用，不僅導(dǎo)致耐藥性菌株的出現(xiàn)，而且還會(huì)影響食品安全和生態(tài)平衡，間接嚴(yán)重危害人類(lèi)健康。
　　本研究以滅活燦爛弧菌為抗原，免疫蛋雞制備特異性卵黃抗體(IgY)。酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定特

2、異性IgY最高效價(jià)達(dá)1∶320000。經(jīng)水稀釋-凍融-兩步鹽析-超濾分離純化IgY，最終獲得抗體純度達(dá)83％。
　　液體和固體兩種培養(yǎng)條件下，特異性IgY能顯著抑制燦爛弧菌的生長(zhǎng)(P＜0.05)，并有效防止該菌在培養(yǎng)基上的黏附，表明IgY具有黏附阻滯作用。結(jié)晶紫染色法和微生物碳?xì)湮侥芰?shí)驗(yàn)表明，特異性IgY能顯著降低燦爛弧菌的被膜形成能力和表面疏水性(P＜0.05)，進(jìn)而減弱其黏附力，降低其致病性。免疫熒光電鏡、掃描電鏡和透射電

3、鏡觀察顯示，特異性IgY與抗原菌親和力強(qiáng)，且能凝集抗原菌，并使菌體表面結(jié)構(gòu)變得粗糙，改變其細(xì)胞表面結(jié)構(gòu)，甚至影響菌體細(xì)胞壁完整性。特異性IgY與燦爛弧菌的反應(yīng)液中堿性磷酸酶含量顯著升高(P＜0.05)，表明特異性IgY能夠破壞菌體細(xì)胞壁。
　　動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，腹腔攻毒后注射和浸浴特異性IgY，感染仿刺參的存活率分別為80％和75％，極顯著地高于對(duì)照組的20％和15％(P＜0.01);浸浴特異性IgY后腹腔攻毒，感染仿刺參的存活率為80

4、％，顯著高于對(duì)照組的15％(P＜0.01)，表明特異性IgY對(duì)感染仿刺參具有良好的治療和預(yù)防效果。平板菌落計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)表明，注射特異性IgY后，仿刺參體壁、腸道、呼吸樹(shù)和體腔液中載菌量顯著降低(P＜0.05)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果表明，特異性IgY處理的吞噬細(xì)胞，其吞噬率提高了56.5％(P＜0.05)，共聚焦顯微鏡觀察也同樣證實(shí)上述結(jié)果。免疫相關(guān)酶和因子檢測(cè)表明，特異性IgY能顯著增強(qiáng)仿刺參堿性磷酸酶、酸性磷酸酶、溶菌酶、超氧化物歧化酶、一