廣西豬鏈球菌2型流行病學(xué)研究.pdf

1、豬鏈球菌2型是人畜共患傳染性病原，為了解豬鏈球菌2型在廣西的分布及流行規(guī)律，本研究建立了豬鏈球菌2型三重PCR檢測(cè)方法進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。該法利用鏈球菌屬(Streptococcus)、豬鏈球菌亞種(S.suis)以及豬鏈球菌2型(SS2)的保守核苷酸序列分別設(shè)計(jì)了3對(duì)引物用于PCR檢測(cè)，確保了檢測(cè)的高度特異性，試驗(yàn)表明，所建立的三重PCR檢測(cè)方法敏感性高，可以檢測(cè)到20CFU/ml的鏈球菌。 本研究對(duì)廣西14個(gè)市中的13個(gè)市29

2、個(gè)縣區(qū)(5個(gè)為曾發(fā)生人感染豬鏈球菌病縣區(qū))的健康豬扁桃體和病死豬臟器(肝、脾、肺或淋巴結(jié))進(jìn)行了豬鏈球菌2型的流行病學(xué)調(diào)查。樣品接種綿羊血平板(添加了25ug/L的萘啶酮酸和15ug/L的多粘菌素)和葡萄糖肉浸液肉湯(添加了10％馬血清)分離細(xì)菌及增菌。通過(guò)建立的三重PCR方法，從健康豬和病死豬樣品中檢測(cè)出鏈球菌分別為85.9％(4081/4752)、86.1％(368/427)，豬鏈球菌分別為52.8％(2507/4752)、44.5

3、％(190/427)，豬鏈球菌2型分別為2.7％(127/4752)、2.6％(11/427)，結(jié)果表明廣西豬群鏈球菌帶菌率高，豬鏈球菌2型帶菌率低；來(lái)自曾發(fā)生人感染豬鏈球菌病縣區(qū)和未曾發(fā)生人感染豬鏈球菌病縣區(qū)的健康豬扁桃體豬鏈球菌2型的分離率差異不顯著(P>0.05)，分別是3.2％(45/1401)和2.4％(82/3351)；夏季和冬季采集的健康豬扁桃體豬鏈球菌2型的分離率差異也不顯著(P>0.05)，分別為2.9％(111/38

4、77)和1.8％(16/875)。 本研究對(duì)分離到的部分豬鏈球菌2型菌株(64株，其中分離自健康豬56株，分離自病死豬8株)進(jìn)行了進(jìn)一步的毒力基因核苷酸序列分析(CPS基因的CPS2J片段)，結(jié)果顯示64株廣西豬鏈球菌2型菌的CPS2J核苷酸和氨基酸的同源性高，分別為在98.7％-100％和97.0％以上；廣西株與江蘇人源菌株98015和四川豬源菌株SC01的同源性很高，核苷酸同源性在99.1％-100％之間，氨基酸同源性在97

5、.9％以上。 系統(tǒng)樹(shù)的分析表明，64株廣西豬鏈球菌2型菌株可以分為兩大群，即Ⅰ群和Ⅱ群，Ⅰ群包括8株分離自病死豬的豬鏈球菌2型菌株和大部分分離自健康豬的菌株，Ⅰ群又分為Ⅰa和Ⅰb 2個(gè)亞群，Ⅰb亞群只有GXGL547株和GXYL22株，它們的CPS2J堿基因在401位由A變?yōu)镃，形成了CAATTG Mun Ⅰ的酶切位點(diǎn)，其余的屬于Ⅰa亞群；Ⅱ群中有10株，全部分離自健康豬，所有Ⅱ群菌株CPS2J在496位點(diǎn)出現(xiàn)了相同的變異，堿基