電針對兔膝骨關節(jié)炎軟骨p38表達的影響.pdf

1、 目的：骨關節(jié)炎(osteoarthritis,OA)又叫作退行性骨關節(jié)病,好發(fā)于中老年人,以關節(jié)軟骨進行性退化變性、軟骨下骨質反應性變化及關節(jié)邊緣的骨贅形成為病理特點,是負重關節(jié)的常見疾病。絲裂原活化蛋白激酶(mitogen activated protein kinases, MAPKs) 是細胞內重要的信號傳遞者,參與了多種生理過程的調節(jié),被認為在OA發(fā)病過程中發(fā)揮著重要作用。軟骨中 p38 絲裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)

2、 是 MAPKs 中的亞型之一,它在軟骨細胞凋亡、細胞因子產生、轉錄調節(jié)及缺血再灌注損傷中起重要作用,它參與膠原蛋白網絡斷裂,蛋白多糖降解,是反映OA病變程度的特異性指標,在正常軟骨中少見,但在OA軟骨中則有明顯升高。針灸能疏通經絡、調和陰陽, 能促進細胞增殖、蛋白質合成、刺激膠原和細胞因子生成,可以促進軟骨、韌帶和肌腱等組織損傷的修復,對OA具有鎮(zhèn)痛、消腫、改善關節(jié)活動功能的作用。本課題通過觀察電針治療對兔膝OA的軟骨大體形態(tài)變化、軟

3、骨細胞病理改變,以及對軟骨細胞p38表達的影響,探討電針對兔膝OA模型軟骨細胞修復的影響及作用機制。方法：(1)對象和干預措施：健康新西蘭大耳兔36只,隨機分為三組,每組12只。正常組12只兔常規(guī)飼養(yǎng),不給予任何干預措施。模型組12只兔和電針治療組12只兔都采用通過管型石膏將左膝關節(jié)保持于伸直位制動固定的方法建立本實驗所需OA模型。正常組和模型組在飼養(yǎng)6周后通過耳緣靜脈注入空氣處死,切開左膝關節(jié),取內側髁軟骨觀察造模后相關指標變化。治療

4、組12只兔飼養(yǎng)6周后進行電針治療14d,以同樣的方法處死并觀察治療后相同指標改變情況。電針治療采取患膝關節(jié)“內膝眼、外膝眼、陽陵泉、血海、足三里和梁丘”6 個穴位電針治療,電壓6 V , 疏波4HZ,密波20HZ,脈沖寬度0.5ms,輸出強度2 mA ,每天1次,每次電針30 min,連續(xù)治療14d。(2)觀察指標：①觀察三組兔軟骨標本的大體形態(tài)變化；②將軟骨標本制成切片,HE 染色和甲苯胺藍染色,光鏡觀察相關指標的變化,并且按Mank

5、in’s評分標準進行評分,用抗兔的p38試劑盒檢測左膝關節(jié)內側髁軟骨p38含量的表達變化.(3)統(tǒng)計學處理：用SPSS13.0 for WINDOWS進行統(tǒng)計學分析。所得數值結果采用x ±s表示,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義,P<0.01有顯著性差異。 結果：(1)軟骨大體觀察：正常對照組兔左膝關節(jié)無明顯的關節(jié)積液,軟骨面外觀光滑呈藍白色,顏色深且明亮,基本無裂紋,軟骨結構Mankin’s評分為0分。模型組左膝關節(jié)基本上都出現關節(jié)積

6、液,關節(jié)面粗糙,甚至部分部位出現糜爛,全部軟骨表面呈灰黃色,光澤度明顯降低,表面略有不平,較粗糙；電針治療組只有部分兔膝關節(jié)出現關節(jié)積液及滑膜增生,軟骨改變仍然以粗糙為主,但程度較模型組較輕；電針治療組與模型組的軟骨結構按 Mankin’s 評分比較,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。(2)HE染色和甲苯胺藍染色觀察：正常對照組HE染色顯示軟骨表面基本平整,軟骨層的大小勻稱；細胞大小一致,潮線完整性好且甲苯胺藍染色按規(guī)律均勻分布；模型組

7、用HE染色可見軟骨明顯變薄,軟骨表面出現裂隙,軟骨細胞大量簇聚且數量明顯減少,可見潮線紊亂同時甲苯胺藍染色也顯著變淡；電針治療組光鏡觀察示軟骨細胞分布比較整齊且細胞數較模型組有所增多,軟骨表面相對平整,裂隙少,軟骨層厚度較模型組厚,也有潮線紊亂,甲苯胺藍染色程度失染較輕。正常對照組與模型組、模型組與電針治療組按Mankin’s評分比較,差異均有統(tǒng)計學意義 (P<0.05)。(3)軟骨免疫組化p38測定：正常對照組僅在表層軟骨細胞內偶見p

8、38弱陽性表達,為胞漿內少量黃褐色顆粒；模型組中軟骨細胞基質、胞漿中都有p38表達,全層可見,尤以中層密度最高,成熟軟骨細胞中最多,為深黃褐色顆粒；電針治療組中,軟骨表層可見散在的軟骨細胞胞漿中存在p38表達,為淺黃褐色顆粒。在統(tǒng)計學上正常對照組與模型組、模型組與電針治療組間比較,差異均有顯著統(tǒng)計學意義 (P<0.01)。 結論：(1)本研究采取管型石膏將兔左膝關節(jié)保持于伸直位加壓制動固定的方法制作兔膝OA模型揭示了OA的病理變化,本實