TGF-β1誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞間質(zhì)轉(zhuǎn)化對肺纖維化的意義研究.pdf

1、目的:以TGF-β1誘導(dǎo)A549細(xì)胞出現(xiàn)上皮細(xì)胞-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT),探討EMT過程的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑對肺纖維化發(fā)病機(jī)制的意義。
　　 方法:體外培養(yǎng)A549細(xì)胞,以TGF-β15ng/ml進(jìn)行干預(yù),收集不同時(shí)段的細(xì)胞,用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測上皮及間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物的mRNA在0h、1h、3h、6h、12h和24 h的表達(dá)水平,Westernblot檢測上皮及間質(zhì)

2、細(xì)胞的標(biāo)志物在0h、3h、6h、12h、24h、48h和72 h的表達(dá)水平,以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白P-Smad2/3、Snaill、Snai12在0h、24h、48h的表達(dá)水平,應(yīng)用倒置相差顯微鏡觀察TGF-β1干預(yù)前后細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化,并在0h、24h、48h照相記錄。
　　 結(jié)果:TGF-β15ng/ml干預(yù)后,A549細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)志物的mRNA和蛋白表達(dá)隨著時(shí)間延長總體下調(diào)(P<0.05),間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物的mRNA和蛋白表達(dá)上

3、調(diào)(P<0.05)；信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白P-Smad2/3、Snaill上調(diào)(P<0.05),snail2弱表達(dá)(P>0.05)；倒置相差顯微鏡觀察到TGF-β1干預(yù)后A549細(xì)胞由鵝卵石狀變?yōu)樗笮?形態(tài)如同肌纖維母細(xì)胞。
　　 結(jié)論:TGF-β1可以在體外誘導(dǎo)肺泡上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化,其機(jī)制與Smad2/3、Snaill信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑相關(guān),提示肺泡上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化是肺纖維化發(fā)生的直接因?yàn)?而Smad2/3、Snaill信號轉(zhuǎn)導(dǎo)