葡萄糖對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞白介素-18表達(dá)的影響及其機(jī)制初探.pdf

1、研究目的：
　　通過對(duì)不同濃度的葡萄糖(glucose, GLU)和糖波動(dòng)環(huán)境下，小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(mouse peritoneal macrophages, MPM)白介素-18(interleukin-18, IL-18) mRNA的表達(dá)情況及IL-18分泌量的變化和不同培養(yǎng)時(shí)間對(duì)高血糖環(huán)境下MPM的IL-18 mRNA表達(dá)及IL-18分泌量變化的影響，以及不同濃度的JNK通路抑制劑對(duì)高血糖狀態(tài)下MPM的IL-18 mRNA表

2、達(dá)及IL-18分泌量影響進(jìn)行研究，以探討糖尿病時(shí)MPM參與糖尿病大血管病變的機(jī)制。
　　研究方法：
　　1分離純化的MPM隨機(jī)分為6組：1組、2組、3組、4組、5組（GLU濃度分別為4.0 mmol/L、8.0 mmol/L、16.0 mmol/L、24.0 mmol/L和32.0 mmol/L）和GLU濃度波動(dòng)組（GLU濃度8.0 mmol/L1.5小時(shí)-24.0 mmol/L1.5小時(shí)-16.0 mmol/L1.5小時(shí)-

3、32.0 mmol/L1.5小時(shí)）。利用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(reverse-transcription-polymer chain reaction, RT-PCR）和酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)技術(shù)分別檢測(cè)各組MPM的IL-18 mRNA的表達(dá)情況和IL-18的分泌量。
　　2在3 h、6 h、12 h和18 h時(shí)間點(diǎn)下，把分離純化的MPM隨機(jī)分為4組

4、。使用半定量RT-PCR方法和ELISA法在32.0 mmol/L GLU濃度下分別檢測(cè)各組MPM的IL-18 mRNA的表達(dá)及IL-18的分泌量。
　　3分離純化MPM，根據(jù) c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)通路抑制劑SP600125的濃度隨機(jī)分為4組:陰性對(duì)照組，5 umol/L組，10 umol/L組，15 umol/L組。在32.0 mmol/L GLU濃度下，使用半定

5、量RT-PCR方法和ELISA法分別檢測(cè)各組MPM的IL-18 mRNA的表達(dá)和IL-18的分泌量。
　　研究結(jié)果：
　　1高糖促進(jìn)MPM的IL-18表達(dá)。MPM的在GLU含量為4 mmol/L的RPMI1640培養(yǎng)基中表達(dá)很少，IL-18/?-actin的比值為0.13±0.04；在8 mmol/L GLU組，16 mmol/L GLU組、24 mmol/L GLU組和32 mmol/L GLU組IL-18表達(dá)逐漸升高，各

6、組IL-18分泌具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。在含32 mmol/L GLU的1640培養(yǎng)液中孵育6小時(shí)，其IL-18/?-actin的比值達(dá)1.04±0.03，可見高糖促進(jìn)MPM的IL-18的表達(dá)；在GLU波動(dòng)組，IL-18/?-actin的比值為0.78±0.05，較32 mmol/L GLU組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（（P<0.001)，較24 mmol/L GLU組高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。各組IL-18分泌量變化的

7、趨勢(shì)與各組IL-18 mRNA表達(dá)的變化趨勢(shì)一致，組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　2高糖培養(yǎng)下的MPM的IL-18表達(dá)變化與培養(yǎng)時(shí)間的關(guān)系。3h組、6h組和12h組相對(duì)灰度值IL-18/β-actin分別為0.78±0.07、1.04±0.02和1.22±0.05，各組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01)。在培養(yǎng)18 h時(shí)，相對(duì)灰度值IL-18/β-until為0.59±0.07，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001)。各組

8、IL-18分泌量變化的趨勢(shì)與各組IL-18 mRNA表達(dá)的變化趨勢(shì)一致，組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　3 SP600125對(duì)高糖培養(yǎng)的MPM的IL-18 mRNA基因表達(dá)及分泌量的影響。在0 umol/L組，5 umol/L組，10 umol/L組，15 umol/L組相對(duì)灰度值IL-18/β-actin分別為1.22±0.03、1.03±0.05、0.74±0.07和0.57±0.08。組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

9、（P<0.01)。各組IL-18分泌量變化的趨勢(shì)與各組IL-18 mRNA表達(dá)的變化趨勢(shì)一致，組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　研究結(jié)論：
　　1 GLU促進(jìn)MPM的IL-18表達(dá)和分泌。波動(dòng)的GLU濃度對(duì)IL-18表達(dá)和分泌有重要影響。
　　2在12h內(nèi)，隨時(shí)間延長(zhǎng)，高糖環(huán)境下MPM的IL-18的表達(dá)和分泌增加，在12小時(shí)后隨時(shí)間下降。
　　3 JNK通路可能是高糖培養(yǎng)的MPM的IL-18表達(dá)和分泌