骨髓間充質(zhì)干細胞立體定向移植治療大鼠脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、目的：研究骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)立體定向移植對大鼠脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復(fù)的影響，并探討其可能的治療機制，為脊髓損傷的臨床治療提供有價值的理論依據(jù)。
　　方法：采用密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法體外分離骨髓間充質(zhì)干細胞，于移植前摻入10 mg/L的BrdU進行標(biāo)記。將成年雌性Wistar大鼠以動脈瘤夾閉法制備大鼠脊髓損傷模型后隨機分為對照組、生理鹽水組與移植組。移植組大鼠致傷后第7天，通過立體定向途徑移植骨髓間充質(zhì)干細胞到脊髓損

2、傷中心，生理鹽水組以同樣方式給予等量生理鹽水，對照組大鼠不做處理。于大鼠脊髓損傷前及損傷后第7(移植前)，14，30，60，90天進行BBB后肢功能評分和軀體感覺誘發(fā)電位(SEP)、運動誘發(fā)電位(MEP)檢測；損傷第90天處死大鼠，觀察其脊髓組織中有無BrdU陽性細胞、Brdu+神經(jīng)元特異性烯醇化酶、Brdu+膠質(zhì)纖維酸性蛋白、Brdu+堿性成纖維細胞生長因子、Brdu+腦源性神經(jīng)生長因子免疫組織化學(xué)雙染陽性細胞。
　　結(jié)果：(1

3、)通過密度梯度離心法結(jié)合貼壁篩選法分離大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞，在體外進行傳代、擴增。經(jīng)流式細胞儀檢測證實分離所得細胞為骨髓間充質(zhì)干細胞。(2)用動脈瘤夾閉法制作大鼠脊髓損傷模型，損傷后第1天，所有大鼠BBB后肢功能評分為0分，運動誘發(fā)電位、體感誘發(fā)電位波型均消失，證實造模成功。(3)骨髓間充質(zhì)干細胞移植組大鼠BBB后肢功能評分恢復(fù)優(yōu)于對照組(P<0.05)；生理鹽水組BBB評分在損傷后30 d內(nèi)恢復(fù)速度慢于對照組(P<0.05)，至第90

4、天與對照組比較無顯著性差異(P>0.05)。(4)自損傷后第30天開始，細胞移植組大鼠運動誘發(fā)電位潛伏期及體感誘發(fā)電位P1波潛伏期的恢復(fù)均優(yōu)于對照組(P<0.05)，并持續(xù)至實驗結(jié)束。(5)在移植組大鼠脊髓損傷中心及頭、尾端距離脊髓損傷中心1cm處均可見BrdU染色陽性細胞及Brdu+神經(jīng)元特異性烯醇化酶、Brdu+膠質(zhì)纖維酸性蛋白、Brdu+堿性成纖維細胞生長因子、Brdu+腦源性神經(jīng)生長因子免疫組織化學(xué)雙染陽性細胞。
　　結(jié)論

5、：(1)骨髓間充質(zhì)干細胞可以在體外分離、培養(yǎng)及傳代。(2)MSCs骨髓間充質(zhì)干細胞促進SCI大鼠的神經(jīng)功能的恢復(fù)，在行為學(xué)評分及運動誘發(fā)電位、感覺誘發(fā)電位檢測方面得到明顯改善。(3)其機制可能與移植的MSCs可以在SCI大鼠脊髓內(nèi)存活、遷移，并分化為神經(jīng)元樣細胞和神經(jīng)膠質(zhì)細胞樣細胞、上調(diào)宿主神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、bFGF的表達等機制有關(guān)。(4)骨髓間充質(zhì)干細胞移植治療SCI大鼠方法安全、有效，組織學(xué)檢查沒有腫瘤樣細胞及異常分化細胞存在。