山羊痘病毒N1L基因缺失重組毒株的構建及其生物特性研究.pdf

1、本研究以GTPV基因組為模板，以N1L基因側翼序列為同源重組左右臂構建了表達綠色熒光蛋白及黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶的轉移載體質粒pLR-EGFP-gpt。將pLR-EGFP-gpt與GTPV共轉染Vero細胞（非洲綠猴腎細胞）并在細胞內發(fā)生同源重組，通過加壓篩選純化出缺失N1L基因的重組病毒GTPV△N1L。采用相同方法在pLR-EGFP-gpt中反向插入N1L基因表達盒構建了N1基因缺失后再拯救的重組轉移載體pLR-EGFP-gp

2、t-N1Lrev，并與GTPV共轉染后篩選出恢復突變的重組病毒GTPV N1Lrev。遺傳穩(wěn)定性和生物學特性鑒定證實，GTPV△N1L能在至少10代內穩(wěn)定遺傳，且在細胞病變和生長性能等方面與親本毒株相比均未發(fā)生顯著改變，但是相同毒價的GTPV△N1L與親本毒株在病毒拷貝數上相差30倍，初步證實缺失N1L基因并沒有對病毒在培養(yǎng)細胞中復制產生太大影響，但是使病毒毒力有一定程度的降低，表明N1L可能為病毒毒力因子之一。
　　擴增GTPV