亞硫酸氫鈉測(cè)序法定量分析胃癌RUNX3基因甲基化水平.pdf

1、胃癌是我國發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，有證據(jù)表明胃癌的發(fā)生與抑癌基因突變或者異常表達(dá)有一定的相關(guān)性。RUNX3基因是新發(fā)現(xiàn)的腫瘤抑癌基因，屬于RUNX轉(zhuǎn)錄因子家族成員，位于人染色體lp36.1。近期研究顯示RUNK3基因啟動(dòng)子區(qū)過甲基化導(dǎo)致RUNK3表達(dá)減少或缺失，在胃癌發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色。 目的 定量分析人胃癌組織及其相應(yīng)非腫瘤胃組織RUNX3基因甲基化水平，及胃癌細(xì)胞中RUNX3基因甲基化水平，分析RUN

2、X3甲基化水平與胃癌之間的關(guān)系。 方法 對(duì)3株分化程度不同胃癌細(xì)胞株，及25例不同惡性程度的原發(fā)性胃癌病人胃癌組織、對(duì)應(yīng)非腫瘤胃粘膜組織，采用BSP法(bisulfite genomic sequencing，亞硫酸氫鈉測(cè)序法)檢測(cè)RLINK3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島內(nèi)CpG位點(diǎn)的甲基化狀況。 結(jié)果 1.RUNX3 mRNA表達(dá)缺失的胃癌細(xì)胞株MKN28甲基化水平為100.00％；存在RUNX3 mRNA表達(dá)

3、的2株胃癌細(xì)胞株甲基化水平為0-30.77％。 2．25例胃癌病人RUNX3啟動(dòng)子區(qū)呈超甲基化狀態(tài)，CpG島內(nèi)包含13個(gè)CpG位點(diǎn)，胃癌組織CpG位點(diǎn)甲基化個(gè)數(shù)位10-13，平均12．4；甲基化水平為76.92％(10/13)-100.00％(13/13)；其配對(duì)胃粘膜組織CpG位點(diǎn)甲基化個(gè)數(shù)為8-13，平均11.52；甲基化水平為61.54％(8/13)-100.00％(13/13)；平均甲基化位點(diǎn)個(gè)數(shù)為12.4v11.52，