卵巢癌耐藥機(jī)制淺探.pdf

1、目的:
　　1.探索microRNA在卵巢癌BRCAness中的作用,證實(shí)miR-9參與卵巢癌順鉑耐藥。
　　2.研究Dicer1的表達(dá)和卵巢癌預(yù)后之間的關(guān)系,并揭示潛在的機(jī)制。
　　3.研究ROS相關(guān)通路和卵巢癌預(yù)后之間的關(guān)系,并建立ROS相關(guān)通路的綜合評分,實(shí)現(xiàn)對卵巢癌患者預(yù)后的判斷。
　　材料與方法:
　　1.通過生物信息學(xué)分析,miRNA文庫篩選靶向調(diào)節(jié)BRCA1基因的microRNA。在卵巢癌細(xì)胞

2、系中,通過對miR-9和BRCA1的基因干預(yù),證實(shí)miR-9可以通過靶向抑制BRCA1,參與卵巢癌BRCAness形成。檢測HR通路活性,驗(yàn)證miR-9通過調(diào)控HR功能參與順鉑耐藥。
　　2.分析卵巢癌患者表達(dá)譜芯片中Dicer1的表達(dá)和預(yù)后之間的關(guān)系。免疫組化檢測Dicer1在卵巢癌組織中表達(dá)。
　　3.整理TCGA卵巢癌表達(dá)譜芯片數(shù)據(jù),挑選ROS相關(guān)通路所有基因,K-M分析發(fā)現(xiàn)和卵巢癌預(yù)后相關(guān)的候選基因,建立數(shù)學(xué)模型(R

3、OS相關(guān)特性總分),探索ROS相關(guān)特性總分和卵巢癌預(yù)后之間的關(guān)系,并用另一個(gè)外部數(shù)據(jù)庫(Tothill數(shù)據(jù)庫)進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果:
　　1.miRNA文庫篩選發(fā)現(xiàn)miR-9可以靶向調(diào)節(jié)BRCA1基因。在卵巢癌細(xì)胞系中發(fā)現(xiàn)miR-9可以通過靶向抑制BRCA1,參與卵巢癌BRCAness形成,從而調(diào)控卵巢癌細(xì)胞的鉑類耐藥和對靶向藥物PARP抑制劑的敏感性的機(jī)制。通過新鮮組織中使用qPCR技術(shù),及卵巢癌組織芯片中使用原位雜交和免

4、疫組化技術(shù)分別研究了miR-9和BRCA1在卵巢癌組織中表達(dá),發(fā)現(xiàn)BRCA1和miR-9表達(dá)水平的呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)性,并且二者均為卵巢癌鉑類基礎(chǔ)的化療耐藥及預(yù)后的獨(dú)立影響因素。在裸鼠移植瘤模型中,發(fā)現(xiàn)上調(diào)miR-9可以有效地增加順鉑的治療效果,并使原本對PARP抑制劑不敏感的卵巢癌細(xì)胞從PARP抑制劑中獲益。另外,PARP抑制劑對BRCA1缺陷的腫瘤表現(xiàn)為良好療效且毒副作用很低。
　　2.Dicer1低表達(dá)卵巢癌患者預(yù)后更差,降低Dic

5、er1表達(dá)增加卵巢癌細(xì)胞對順鉑耐藥。Dicer低表達(dá)增加卵巢癌細(xì)胞對順鉑耐藥。
　　3.挑選ROS相關(guān)通路所有基因共179個(gè),K-M分析發(fā)現(xiàn)和卵巢癌預(yù)后相關(guān)的候選基因共25個(gè),通過這25個(gè)基因的表達(dá)高低,建立ROS相關(guān)特性總分。并發(fā)現(xiàn)ROS相關(guān)特性總分和卵巢癌的預(yù)后密切相關(guān)(P<0.001)。Tothill數(shù)據(jù)庫驗(yàn)證發(fā)現(xiàn),ROS相關(guān)特性總分和卵巢癌臨床預(yù)后相關(guān)(P=0.026)。并且ROS相關(guān)特性總分對卵巢癌預(yù)后的預(yù)測能力優(yōu)于臨床

6、病理因素。
　　討論:
　　1.miR-9可靶向調(diào)控BRCA1基因表達(dá),從而影響卵巢癌細(xì)胞對DNA損傷的修復(fù)能力。作為一個(gè)新的有潛力的治療靶標(biāo),miR-9可能增強(qiáng)卵巢癌對鉑類基礎(chǔ)化療的敏感性和拓展PARP抑制劑的應(yīng)用范圍。
　　2.Dicer1低表達(dá)卵巢癌患者預(yù)后更差,Dicer低表達(dá)增加卵巢癌細(xì)胞對順鉑耐藥。
　　3.腫瘤細(xì)胞內(nèi)ROS平衡和卵巢癌預(yù)后相關(guān),ROS相關(guān)特性總分和卵巢癌預(yù)后相關(guān),其預(yù)測卵巢癌預(yù)后的作