辣椒素對(duì)內(nèi)臟高敏感大鼠胃酸影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過(guò)觀察不同劑量的辣椒素(capsaicin,CAP)對(duì)內(nèi)臟高敏感大鼠胃酸分泌、胃底腺區(qū)組織內(nèi)辣椒素受體(vanilloid receptor subtype1,VR1)及降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和 P物質(zhì)(substance P,SP)、血漿胃泌素(GAS)和胃粘膜屏障的影響,探討不同劑量的CAP對(duì)內(nèi)臟高敏感大鼠胃酸的影響及其機(jī)制。方法:(1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:60

2、只SD大鼠,雌雄不拘,體重180g~200g之間,隨機(jī)分為A組(對(duì)照組)、B組(模型組)、C1組(CAP1組)、C2組(CAP2組)及C3組(CAP3組),每組大鼠12只。(2)內(nèi)臟高敏感大鼠模型的建立:實(shí)驗(yàn)大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)2w,自由進(jìn)食進(jìn)水。造模方法:A組腹腔注射生理鹽水,1ml/鼠；B組、C1組、C2組和C3組大鼠腹腔注射雞卵清白蛋白(chickenegg albumin),1ml/鼠,制備內(nèi)臟高敏感大鼠模型。造模過(guò)程中觀察大鼠一般情

3、況。2w后取A組全部大鼠12只組成正常對(duì)照組,隨機(jī)從B組、C1組、C2組和C3組中抽取共15只大鼠組成模型對(duì)照組采用肛門(mén)直腸擴(kuò)張(colorectal distention,CRD)實(shí)驗(yàn)以觀察大鼠腹部撤離反射(abdominalwithdrawal reflex,AWR),并用AWR評(píng)分評(píng)估大鼠對(duì)直腸擴(kuò)張刺激的內(nèi)臟感覺(jué)改變。(3)CAP的使用方法及劑量:大鼠造模成功后進(jìn)行CAP治療實(shí)驗(yàn),具體方法如下:A組:自由進(jìn)食進(jìn)水,生理鹽水10mL

4、/kg/d分2次灌胃,連續(xù)2w；B組:自由進(jìn)食進(jìn)水,生理鹽水10mL/kg/d分2次灌胃,連續(xù)2w；C1組:自由進(jìn)食進(jìn)水,CAP1mg/kg/d分2次灌胃灌胃,容積為10mL/kg/d,連續(xù)2w；C2組:自由進(jìn)食進(jìn)水,CAP5mg/kg/d分2次灌胃灌胃,灌胃容積為10mL/kg/d,連續(xù)2w；C3組:自由進(jìn)食進(jìn)水,CAP20mg/kg/d分2次灌胃,灌胃容積為10mL/kg/d,連續(xù)2w。(4)檢測(cè)指標(biāo)及方法:①造模及給藥過(guò)程中觀察大

5、鼠的一般情況。②胃酸的測(cè)定:所有大鼠于實(shí)驗(yàn)前一夜開(kāi)始禁食(不禁水),末次灌胃后1h,用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2％的戊巴比妥鈉(40mg/kg)腹腔注射麻醉,打開(kāi)腹腔,結(jié)扎食管胃連接部和幽門(mén)部,將整個(gè)胃取出,剪開(kāi)胃并用生理鹽水清洗胃內(nèi)容物,收集清洗液,用酸堿滴定法測(cè)定胃酸。③胃底腺區(qū)組織內(nèi)VR1和CGRP、SP的表達(dá)情況:取各組大鼠胃底腺區(qū)組織(約0.5cm×0.5cm)全層一塊,立刻置于4％的多聚甲醛中充分固定2h,石蠟包埋,連續(xù)5μm切片,用免疫

6、組化方法分別進(jìn)行CGRP、SP、VR1測(cè)定。④血漿GAS:心臟采血2ml,4℃離心后提取上清液,用放射免疫法檢測(cè)血漿 GAS水平的變化。⑤胃粘膜屏障改變:把清洗過(guò)胃內(nèi)容物之后的胃置于4％的多聚甲醛中充分固定后,肉眼觀察胃粘膜形態(tài),采用 Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評(píng)分評(píng)定胃粘膜損傷情況,并取胃粘膜組織送病理組織學(xué)檢查,光鏡下對(duì)HE染色后的胃粘膜進(jìn)行觀察。結(jié)果:(1)動(dòng)物一般情況:造模過(guò)程中,A組大鼠精神狀態(tài)好,行動(dòng)靈活,食欲佳,皮毛光澤,大小便正常

7、,體重增加；B組、C1組、C2組、C3組大鼠出現(xiàn)好斗,易激惹,互相撕咬等情況,但無(wú)死亡。隨著CAP治療時(shí)間延長(zhǎng),C1組、C2組、C3組大鼠好斗、激惹、互相撕咬情況減少,而B(niǎo)組大鼠無(wú)明顯減少。在灌胃過(guò)程中C1組有5只大鼠、C2組有5只大鼠、C3組有6只大鼠曾出現(xiàn)嗆咳,但均無(wú)窒息和死亡。(2)AWR評(píng)分結(jié)果:正常對(duì)照組注水1ml、3ml和5ml的AWR評(píng)分分別為:0.67±0.50分、1.44±0.53分、2.56±0.53分,模型對(duì)照組注

8、水1ml、3ml和5ml的AWR評(píng)分分別為:0.53±0.52分、2.53±0.52分、3.40±0.63分。隨著氣囊體積的增加,正常對(duì)照組和模型對(duì)照組AWR評(píng)分值逐漸遞增。模型對(duì)照組注水3ml和5ml氣囊擴(kuò)張時(shí)AWR評(píng)分均顯著高于正常對(duì)照組(P<0.05)。(3)胃液總酸度的變化:各組大鼠的胃液總酸度分別為:A組48.17±5.75mmol/L,B組45.67±3.05 mmol/L,C1組45.25±2.93 mmol/L,C2組3

9、4.42±2.28 mmol/L,C3組30.50±4.25 mmol/L。其中B組大鼠胃液總酸度低于A組大鼠,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；C1組大鼠胃液總酸度和B組大鼠胃液總酸度比較沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；隨著CAP劑量增加,C2組大鼠胃液總酸度顯著低于A組(P<0.05),C2組大鼠胃液總酸度顯著低于B組(P<0.05),C2組大鼠胃液總酸度顯著低于C1組(P<0.05)；并且隨著CAP劑量繼續(xù)增加,C3組大鼠胃液總酸

10、度顯著低于A組(P<0.05),C3組大鼠胃液總酸度顯著低于B組(P<0.05),C3組大鼠胃液總酸度顯著低于C1組(P<0.05),C3組大鼠胃液總酸度顯著低于C2組(P<0.05)。(4)胃底腺區(qū)組織內(nèi)VR1的表達(dá)情況:大鼠胃底腺區(qū)組織內(nèi)VR1表達(dá)水平分別為:A組為0.58±0.51分,B組為1.25±0.62分,C1組為2.00±0.60分,C2組為2.58±0.52分,C3組為3.25±0.75分,其中A組VR1表達(dá)水平顯著低于

11、B組(P<0.05),A組VR1表達(dá)水平顯著低于C1組(P<0.05),A組VR1表達(dá)水平顯著低于C2組(P<0.05),A組VR1表達(dá)水平顯著低于C3組(P<0.05)；B組VR1表達(dá)水平也顯著低于C1組(P<0.05),B組VR1表達(dá)水平也顯著低于C2組(P<0.05),B組VR1表達(dá)水平也顯著低于C3組(P<0.05)；隨著CAP劑量的增加,C2組VR1表達(dá)水平顯著高于C1組(P<0.05)；C3組VR1水平也顯著高于C2組(P<

12、0.05)。(5)胃底腺區(qū)組織內(nèi)CGRP、SP的表達(dá)情況:大鼠胃底腺區(qū)組織內(nèi)CGRP表達(dá)水平分別為:A組為1.00±0.43分,B組為1.08±0.52分,C1組為1.58±0.52分,C2組為2.17±0.58分,C3組為2.67±0.49分,其中A組CGRP表達(dá)水平與B組相比無(wú)顯著性差異(P>0.05),A組CGRP表達(dá)水平顯著低于C1組(P<0.05),A組CGRP表達(dá)水平顯著低于C2組(P<0.05),A組CGRP表達(dá)水平顯著低

13、于C3組(P<0.05)；B組CGRP表達(dá)水平也顯著低于C1組(P<0.05),B組CGRP表達(dá)水平也顯著低于C2組(P<0.05),B組CGRP表達(dá)水平也顯著低于C3組(P<0.05)；隨著CAP劑量的增加,C2組CGRP表達(dá)水平顯著高于C1組(P<0.05),C3組CGRP水平也顯著高于C2組(P<0.05)。大鼠胃底腺區(qū)組織內(nèi)SP表達(dá)水平分別為:A組為0.50±0.52分,B組為0.83±0.58分,C1組為0.75±0.45分,

14、C2組為0.75±0.45分,C3組為0.58±0.52分,其中B組SP表達(dá)水平較A組略有升高,但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；其余各組間SP表達(dá)水平均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(6)血漿GAS的變化:大鼠血漿GAS水平分別為:A組49.50±7.51 pg/ml,B組63.25±5.99 Pg/ml,C1組44.33±2.90 pg/ml,C2組37.42±3.55 pg/ml,C3組33.00±2.37pg/ml。其中A組GAS水平顯著低于

15、B組(P<0.05),A組GAS高于C1組(P<0.05),A組GAS高于C2組(P<0.05),A組GAS低于C3組(P<0.05)；B組GAS水平也顯高于C1組(P<0.05),B組GAS水平也顯高于C2組(P<0.05),B組GAS水平也顯高于C3組(P<0.05)；C2組GAS水平相比顯著低于C1組(P<0.05),而C3組的血漿GAS水平顯著低于C2組(P<0.05)。(7)胃粘膜屏障:A組、B組、C1組、C2組及C3組的胃粘

16、膜損傷評(píng)分(Guth標(biāo)準(zhǔn)改良評(píng)分)比較各組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)；光鏡下觀察胃粘膜組織病理學(xué)改變:A組、B組、C1組、C2組大鼠胃粘膜基本光滑,上皮細(xì)胞形態(tài)正常,排列整齊,未見(jiàn)粘膜脫落、充血、水腫、炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及腺體結(jié)構(gòu)紊亂和壞死。C3組大鼠胃粘膜上皮細(xì)胞輕度脫落、充血、水腫,未見(jiàn)腺體結(jié)構(gòu)紊亂和壞死。對(duì)胃粘膜病理?yè)p傷程度進(jìn)行半定量統(tǒng)計(jì),病理?yè)p傷積分A組為0.25±0.45分,B組為0.17±0.39分,C1組為0.32±0.45

17、分,C2組為0.33±0.47分,C3組為0.83±0.72分。其中C3組病理?yè)p傷積分顯著高于A組(P<0.05),C3組病理?yè)p傷積分顯著高于B組(P<0.05),C3組病理?yè)p傷積分顯著高于C1組(P<0.05),C3組病理?yè)p傷積分顯著高于C2組(P<0.05)。
　　 結(jié)論:1.腹腔注射雞卵清白蛋白可成功建立大鼠內(nèi)臟高敏感模型。2.CAP1mg/kg/d、5mg/kg/d及20mg/kg/d連續(xù)灌胃2w可抑制內(nèi)臟高敏感大鼠胃酸