骨髓間充質干細胞促進肝大部切除大鼠肝再生的研究.pdf

1、目的：(1)探討骨髓間充質干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)標記和示蹤方法，優(yōu)化示蹤技術；(2)觀察不同途徑移植的骨髓間充質干細胞在肝大部切除大鼠剩余肝內定植及促進肝再生的作用。
　　 方法：(1)體外分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質干細胞，通過流式細胞儀鑒定間充質干細胞表面抗原(CD29、CD34、CD45、CD90)，分別用BrdU、DAPI以及GFP3種方法標記干細胞，BrdU標記率通過細胞免疫化學鑒定，D

2、API和GFP標記率直接通過熒光顯微鏡進行鑒定，對比觀察三種示蹤技術的優(yōu)缺點。(2)建立肝大部切除(約70％)大鼠模型，分別經尾靜脈和門靜脈向肝切除大鼠移植DAPI標記的第三代骨髓間充質干細胞約1.5×106，單純肝大部切除組作對照組，分別于術后3天、9天采血檢測肝功能，9天后處死大鼠，取肝臟標本，免疫組織化學方法觀察肝內Ki-67的表達及BrdU陽性細胞，并通過熒光顯微鏡觀察兩種移植途徑對大鼠骨髓間充質干細胞向肝臟遷移的影響。

3、　　 結果：(1)流式細胞儀鑒定結果顯示骨髓間充質干細胞CD29、CD90表達陽性，CD34、CD45表達呈陰性。3種標記方法對細胞均未顯示明顯毒性。終濃度為10μmol/L及標記48h、終濃度為1μg/ml及標記12h時分別為BrdU和DAPI的最佳標記濃度及時間。感染復數MOI=8時，GFP慢病毒感染MSCs12h，感染率可達90％以上；(2)尾靜脈移植組和門靜脈移植組9天后肝功能顯示ALB升高，且其差異有統計學意義(均P＜0.0

4、5);尾靜脈移植組和門靜脈移植組肝組織Ki-67表達(103.30±40.44，95.82±26.67vs60.29±35.71個細胞/400倍視野)及BrdU陽性細胞(15.92±3.06，16.01±3.32vs11.63±3.74個細胞/400倍視野)升高，與對照組比較差異均具有統計學意義(均P＜0.05)；DAPI標記陽性的細胞在門靜脈移植組(18.1±3.4個細胞/100倍視野)多于尾靜脈移植組(7.6±2.0個細胞/100倍