新交泰丸對(duì)順鉑腎毒性大鼠TIMP-1表達(dá)的影響.pdf

1、目的：順鉑（cisplatin，DDP）是一種有效的抗腫瘤藥物，但其嚴(yán)重的腎毒性，限制了它在臨床上的廣泛應(yīng)用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究新交泰丸對(duì)DDP腎毒性模型大鼠腎組織中基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1（TIMP-1）表達(dá)的影響，初步探討其對(duì)DDP腎毒性的影響作用，從而為中醫(yī)藥對(duì)抗DDP腎毒性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：取健康成年雄性SD大鼠60只，體重180g～220g。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將其隨機(jī)分為5組（每組12只）：空白對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)空

2、白組）、模型對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)模型組）、苯那普利陽(yáng)性對(duì)照組（簡(jiǎn)稱(chēng)苯那普利組）、新交泰丸低劑量組（簡(jiǎn)稱(chēng)低劑量組）和新交泰丸高劑量組（簡(jiǎn)稱(chēng)高劑量組）。除空白組外，其余各組給予DDP（用生理鹽水配成1mg/ml）尾靜脈注射5mg/kg，每周一次，連續(xù)3周，制備DDP腎毒性大鼠模型，空白組給與等量的生理鹽水替代DDP尾靜脈注射。在第一次尾靜脈注射DDP后開(kāi)始灌胃給藥，每天一次，連續(xù)6周。其中空白組和模型組，灌服溫生理鹽水（1ml/100g），苯那普利

3、組灌服等量的苯那普利（相當(dāng)于1mg/kg/d），低劑量組和高劑量組分別灌服等量的低劑量新交泰丸（相當(dāng)于5g生藥/kg/d）和高劑量新交泰丸（相當(dāng)于15g生藥/kg/d）。每天觀察大鼠的活動(dòng)情況和一般狀態(tài)。剖殺前稱(chēng)重，將其置于代謝籠中，禁食不禁水，收集24h尿液，測(cè)24h尿蛋白（Upro）和N-乙酰β-D氨基葡萄糖苷酶（NAG）。將大鼠麻醉后（10％水合氯醛4ml/kg），股動(dòng)脈采血，測(cè)定血肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）的水平。剖取腎臟

4、組織，石蠟包埋切片，做HE、Masson、PAS染色。運(yùn)用免疫組化技術(shù)分別檢測(cè)各組大鼠腎組織中TIMP-1的表達(dá)，利用HPIAS2000型計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)分析各組大鼠TIMP-1的平均光密度值。
　　 結(jié)果：
　　 1、新交泰丸對(duì)各組大鼠尿中24h Upro、NAG含量的影響
　　 與空白組（8.32±2.06mg/d）比較，模型組大鼠24h Upro含量（14.59±3.97mg/d）顯著升高（P<0.01）

5、；低劑量組（9.14±2.58 mg/d）、高劑量組（9.80±3.03 mg/d）和苯那普利組（10.39±3.33 mg/d）較模型組大鼠24hUpro含量明顯降低（p<0.01或p<0.05）；各治療組間比較，低劑量組、高劑量組較苯那普利組大鼠24h Upro含量降低，但無(wú)顯著性差異（p>0.05）；低劑量組與高劑量組相比，無(wú)顯著性差異（p>0.05）。
　　 與空白組（2.99±0.27 U/L）比較，模型組（4.90±

6、0.90U/L）大鼠尿NAG含量顯著升高（P<0.01）；低劑量組（3.74±0.76U/L）、高劑量組（3.75±0.86 U/L）和苯那普利組（3.80±0.87U/L）較模型組大鼠尿NAG含量明顯降低（p<0.01或p<0.05）；低劑量組、高劑量組和苯那普利組各組間比較，無(wú)顯著性差異（p>0.05）。
　　 2、新交泰丸對(duì)各組大鼠血清BUN，Scr的影響
　　 與空白組（5.31±0.89 mmol/L）比較，模

7、型組（22.70±5.98mmol/L）大鼠血清BUN顯著升高（P<0.01）；低劑量組（14.07±3.88 mmol/L）、高劑量組（13.87±2.73 mmol/L）和苯那普利組（16.70±4.40 mmol/L）較模型組大鼠血清BUN含量明顯降低（p<0.01或p<0.05）；低劑量組、高劑量組和苯那普利組各組間比較，無(wú)顯著性差異（p>0.05）。
　　 與空白組（108.08±11.94umol/L）比較，模型組（

8、142.13±12.92umol/L）大鼠血清Scr顯著升高（P<0.01）；低劑量組（115.42±11.71 umol/L）、高劑量組（118.44±14.85umol/L）和苯那普利組（123.18±14.18 umol/L）較模型組大鼠血清Scr含量明顯降低（p<0.01或p<0.05）；低劑量組、高劑量組和苯那普利組各組間比較，無(wú)顯著性差異（p>0.05）。
　　 3、新交泰丸對(duì)各組大鼠腎組織形態(tài)學(xué)的影響
　　

9、 經(jīng)HE、Masson、PAS染色后光鏡觀察：空白組大鼠腎組織無(wú)明顯病理改變；模型組大鼠腎小管萎縮，管腔內(nèi)有大量的蛋白管型，腎小管上皮細(xì)胞水腫、變性、壞死、脫落，腎小管上皮基膜不均勻增厚、皺縮，間質(zhì)大量炎細(xì)胞浸潤(rùn)、膠原組織和成纖維細(xì)胞增多；低劑量組、高劑量組和苯那普利組上述改變均較模型組減輕，腎小管輕度萎縮，管型減少甚至消失，間質(zhì)可見(jiàn)多少不等的炎細(xì)胞浸潤(rùn)、少量纖維組織增生，腎小球的結(jié)構(gòu)基本正常。
　　 4、新交泰丸對(duì)各組大鼠腎組

10、織 TIMP-1的表達(dá)及其平均光密度值的影響
　　 空白組大鼠腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)TIMP-1微弱陽(yáng)性表達(dá)，腎小球及腎間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)少有表達(dá)；與空白組相比，模型組大鼠腎小管上皮細(xì)胞內(nèi)TIMP-1的表達(dá)明顯增強(qiáng)；與模型組相比，苯那普利組、低劑量組、高劑量組大鼠小管上皮細(xì)胞內(nèi)TIMP-1的表達(dá)明顯減弱。
　　 圖像分析顯示：與空白組（0.0479±0.0309）相比，模型組大鼠TIMP-1的平均光密度值（0.1605±0.0239）

11、顯著增高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.01）；低劑量組、高劑量組和苯那普利組大鼠TIMP-1平均光密度值分別為（0.0686±0.0296，0.0739±0.0361，0.0863±0.0369），均較模型組顯著降低，（p<0.01）；低劑量組、高劑量組和苯那普利組各組間比較，差異無(wú)顯著性（p>0.05）。
　　 結(jié)論：
　　 1、采用尾靜脈注射DDP造模后大鼠尿NAG、24hUpro，血清BUN、Scr明顯升高，腎小管