SP對(duì)幼兔干骺端損傷愈合影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在臨床工作中發(fā)現(xiàn)兒童干骺端骨折合并周圍神經(jīng)損傷很常見，并常導(dǎo)致不同程度的畸形和功能障礙。骨折愈合是一個(gè)非常復(fù)雜的創(chuàng)傷修復(fù)過程，并受諸多因素的影響和調(diào)控，其中神經(jīng)系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用占有非常重要的地位。研究發(fā)現(xiàn)神經(jīng)纖維通過釋放多種神經(jīng)遞質(zhì)分子發(fā)揮調(diào)節(jié)作用，具體的調(diào)節(jié)機(jī)制尚不完全清楚。但是周圍神經(jīng)對(duì)干骺端骨折愈合影響及其調(diào)控機(jī)制有待進(jìn)一步研究。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過建立失神經(jīng)支配的脛骨干骺端損傷模型，然后通過多種物理檢查及鏡下觀察的方法

2、比較實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間干骺端愈合情況差異。探討SP（P物質(zhì)）為代表的神經(jīng)肽對(duì)骨折愈合影響的調(diào)控機(jī)制。為從改善神經(jīng)功能入手來促進(jìn)兒童干骺端骨折愈合提供理論依據(jù)。
　　 方法：選用健康中國大耳白兔幼兔40只，兔齡4-6周，體重1.0～1.5kg，無菌條件下在左后肢膝關(guān)節(jié)前面脛骨結(jié)節(jié)水平設(shè)計(jì)縱形切口，暴露脛骨近端干骺端及骺板，骺板顯示為白色細(xì)線狀，自脛骨內(nèi)側(cè)面骺板下方0.5cm處，應(yīng)用直徑3mm動(dòng)力鉆與骺板平行方向鉆孔，形成長約1cm

3、的骨缺損，注意不要傷及骺板及關(guān)節(jié)軟骨。骨缺損型干骺端損傷較穩(wěn)定，患肢不必行內(nèi)外固定。將所有實(shí)驗(yàn)幼兔隨機(jī)分為兩組：失神經(jīng)支配干骺端損傷組（實(shí)驗(yàn)組），保留神經(jīng)支配干骺端損傷組（對(duì)照組）。無菌條件下將實(shí)驗(yàn)組幼兔左側(cè)后肢坐骨神經(jīng)和股神經(jīng)切斷并切除1cm。術(shù)后將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物置于籠內(nèi)，動(dòng)物飼養(yǎng)選用標(biāo)準(zhǔn)飼料統(tǒng)一喂養(yǎng)，注意保溫，預(yù)防傷口感染。將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在術(shù)后第1，2、4、8周兩組隨機(jī)抽取5只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，空氣栓塞處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，進(jìn)行放射學(xué)檢查，觀察各組動(dòng)物骨

4、缺損區(qū)的骨癡生長和骨橋的連接情況。取出雙側(cè)脛骨剝?nèi)ス侵車能浗M織，肉眼觀察骨痂生長情況。然后將干骺端損傷部位愈合骨痂取材，分別行光鏡檢查，進(jìn)行組織學(xué)分析，評(píng)價(jià)骨折愈合情況及骨痂質(zhì)量及數(shù)量。整理數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，得出結(jié)論。
　　 結(jié)果：X線檢查結(jié)果：術(shù)后1周兩組無明顯差異，干骺端可見不規(guī)則透亮區(qū)，密度較混雜，骨痂量測量結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組：0.09±0.02，對(duì)照組：0.07±0.01，P>0.05，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后2周兩組干骺端均出

5、現(xiàn)條帶狀高密度影，實(shí)驗(yàn)組骨痂量較多，但密度較對(duì)照組低不均勻，骨痂量測量結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組：0.19±0.01，對(duì)照組：0.16±0.01，P<0.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組骨痂量較對(duì)照組多，密度混雜，骨痂量測量結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組：0.31±0.02，對(duì)照組：0.28±0.02，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組仍有大量骨痂，骨痂突出于骨皮質(zhì)表面，密度混雜不均，對(duì)照組外骨痂逐漸塑形成熟，接近正常骨組織，骨痂量測量結(jié)果：實(shí)驗(yàn)組：0.35

6、±0.03，對(duì)照組：0.26+0.02，P<0.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。脛骨近端大體標(biāo)本肉眼觀察：術(shù)后1、2周兩組骨痂以纖維性骨痂為主，質(zhì)地較軟。術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組骨痂量較對(duì)照組多，填充骨缺損。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組骨痂明顯突出于骨表面，呈過度性骨痂生長，但強(qiáng)度較差；對(duì)照組干骺端骨缺損處骨痂填充，較平整，質(zhì)地接近正常骨組織。光鏡進(jìn)行組織學(xué)觀察：術(shù)后第1周，實(shí)驗(yàn)組大量纖維組織增生，有少量細(xì)小新生骨小梁形成；對(duì)照組纖維組織增生活躍，有較多量粗大新生骨小梁形

7、成，其外周可見成骨細(xì)胞。組織學(xué)評(píng)分結(jié)果術(shù)后1周兩組：2.4±0.6，3.0±0.7，兩組無明顯差異（P>0.05）。術(shù)后第2周，實(shí)驗(yàn)組新生骨小梁形成增加，但骨痂生長稀疏、密度較低、排列絮亂；對(duì)照組有較多編織骨形成，成熟度較高，骨痂較致密、順力線排列，呈柵欄狀。兩組組織學(xué)評(píng)分：4.3±0.8，5.5±0.7，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。術(shù)后4周實(shí)驗(yàn)組編織骨形成、成熟度較低，骨痂較多，但相對(duì)稀疏，骨小梁較窄，類骨質(zhì)較厚；對(duì)照組編織

8、骨進(jìn)一步增多成熟并逐漸融合，新骨連接成片，排列規(guī)則，骨小梁較寬、致密，骨小梁間間隙縮小。評(píng)分結(jié)果：5.5±0.6，6.7±0.8，兩組差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組骨痂過度生長，成熟度低，排列紊亂稀疏；對(duì)照組骨痂連接成片，順力線排列規(guī)則，結(jié)構(gòu)接近正常骨組織。組織學(xué)評(píng)分結(jié)果具有顯著差異。SP免疫組化染色觀察，術(shù)后1周實(shí)驗(yàn)組骨痂中可見少許SP陽性表達(dá)，呈散在點(diǎn)狀分布，染色呈淡黃色；對(duì)照組骨痂組織中即可見SP陽性表達(dá)，多沿血

9、管呈灶性分布，染色呈棕黃色。術(shù)后2、4周實(shí)驗(yàn)組骨痂中僅有極低水平的SP表達(dá)；對(duì)照組在編織骨邊緣有大量SP免疫陽性神經(jīng)纖維分布，并逐漸增加，染色明顯加深呈深褐色。術(shù)后8周實(shí)驗(yàn)組SP表達(dá)水平仍極低；對(duì)照組仍有較多SP陽性表達(dá)，但較術(shù)后4周時(shí)明顯減少，染色呈棕色。
　　 結(jié)論：本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果說明：1、骨折修復(fù)過程中SP的分布與骨修復(fù)能力密切相關(guān)，表明SP在骨折修復(fù)過程中發(fā)揮了重要作用。2、周圍神經(jīng)系統(tǒng)對(duì)干骺端骨代謝及其成骨塑形作用具有調(diào)