鴕鳥血液中性粒細胞中抗菌肽的分離純化及其抗菌抗病毒作用的研究.pdf

1、收集鴕鳥新鮮抗凝血，應(yīng)用0.83％氯化氨溶液裂解至染色鏡檢無紅細胞，低溫離心，收集白細胞沉淀。將白細胞沉淀超聲波破碎至染色鏡檢無完整細胞，低溫高速離心提取細胞顆粒。10％醋酸溶液4℃下攪拌萃取抗菌肽。低溫高速離心收集上清液，真空冷凍干燥，用0.01％醋酸溶液溶解即為抗菌肽粗提物。 應(yīng)用離子交換層析法將抗菌肽粗提物初步分離成兩部分即陰離子組分和陽離子組分。將陽離子組分用RP-HPLC法進行分離獲得有抗菌活性的目的蛋白。 應(yīng)

2、用SOS-PAGE凝膠電泳方法檢測目的蛋白的純度，并初步測定其分子量，結(jié)果表明，抗菌活性產(chǎn)物分子量在4，700-4，980Da之間。 粗提物抑菌試驗結(jié)果表明，在鴕鳥中性粒細胞中存在天然抗菌物質(zhì)，并表現(xiàn)出對金黃色葡萄球菌(革蘭氏陽性菌)、大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)和真菌(白色念珠菌)較強的抑制作用。離子交換層析產(chǎn)物的抑菌試驗結(jié)果表明，鴕鳥中性粒細胞中的抗菌物質(zhì)是陽離子性質(zhì)；主要作用于細菌，尤其是對金黃色葡萄球菌(革蘭氏陽性菌)，白色

3、念珠菌(真菌)的抑制作用較大腸桿菌(革蘭氏陰性菌)強。RP-HPLC純化后抑菌試驗結(jié)果表明，從得到的鴕鳥中性粒細胞抗菌肽顯示出較強的抑菌活性。 本試驗采用雞胚接種的方法觀察了鴕鳥中性粒細胞抗菌肽對新城疫病毒以及雞傳染性支氣管炎病毒的滅活作用。將NDV與IBV與抗菌肽以不同的方法混合作用于10日齡的雞胚，測定雞胚尿囊液中NDV血凝效價，并觀察雞胚病變。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與攻毒組比較，鴕鳥中性粒細胞抗菌肽使雞胚尿囊液中NDV血凝效價降低，同