蘭州百合多倍體誘導(dǎo)及鑒定.pdf

1、百合(Lilium brownn. F. E. Brown. Var Viridum Baker)為百合科百合屬多年生草本植物，不僅具有較高的觀賞價(jià)值，有些品種還具有很高的食用價(jià)值和藥用價(jià)值。長(zhǎng)期的無(wú)性繁殖使得各種病毒在百合植株中逐代積累，導(dǎo)致品種嚴(yán)重退化，利用快繁技術(shù)可在短時(shí)間內(nèi)生產(chǎn)大量?jī)?yōu)質(zhì)種苗。而且，經(jīng)過染色體加倍的多倍體百合植株鱗片肥厚、健壯、高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)等特點(diǎn)。因此，百合的快速繁殖技術(shù)和染色體加倍研究具有十分重要的理論意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值

2、。
　　 本研究以蘭州百合為試驗(yàn)材料，利用快速繁殖技術(shù)建立了蘭州百合的快速繁殖體系，并利用秋水仙素對(duì)蘭州百合進(jìn)行了人工多倍體誘導(dǎo)，初步篩選出了一批多倍體材料。蘭州百合快速繁殖體系的建立，主要是對(duì)外植體的消毒方式、初代培養(yǎng)基、繼代增殖培養(yǎng)基及生根培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選。獲得無(wú)菌的外植體是植物組織培養(yǎng)中最基礎(chǔ)最重要的一環(huán)，外植體的消毒效果和分化率直接影響著試驗(yàn)的進(jìn)程。篩選出的最佳消毒方法是洗滌劑浸泡10min，自來水沖洗5h，95％的乙醇

3、消毒100s，0.1％升汞消毒12 min，無(wú)菌水沖洗4～6 次，可得到較高的成活率和誘導(dǎo)率。培養(yǎng)基中的激素濃度與配比是影響百合初代培養(yǎng)、繼代增殖培養(yǎng)及生根培養(yǎng)重要因素。初代誘導(dǎo)分化的最適培養(yǎng)基是MS+BA1.0 mg/L+NAA1.0 mg/L+3％蔗糖，最佳繼代增殖培養(yǎng)基是MS+BA0.5+NAA0.2mg/L+3％蔗糖，百合生根相對(duì)較容易，最佳的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.2 mg/L+3％蔗糖。在建立百合快速繁殖體系的基礎(chǔ)

4、上，利用秋水仙素溶液對(duì)蘭州百合進(jìn)行了人工多倍體誘導(dǎo)，誘導(dǎo)多倍體的材料為百合鱗片，方法采用棉球覆蓋法，秋水仙素處理的最佳濃度和最佳處理時(shí)間分別為0.1％、24h，細(xì)胞誘變率達(dá)60％。對(duì)獲得的蘭州百合多倍體與二倍體進(jìn)行了外部形態(tài)和的氣孔觀察比較，結(jié)果表明：在相同生長(zhǎng)階段和環(huán)境條件下，多倍體植株體現(xiàn)了器官的巨大性，葉片顏色較二倍體深，葉片較厚，并且葉面皺折、粗糙，較脆，易折斷、生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，形態(tài)畸形、矮化。通過對(duì)多倍體和二倍體葉片氣孔大小及密

5、度的測(cè)定，我們發(fā)現(xiàn)，多倍體植株氣孔大小明顯增大，長(zhǎng)度為二倍體的162％，寬度是二倍體的144％，氣孔長(zhǎng)度的增大程度要大于寬度的增大程度。氣孔的密度（單位面積氣孔數(shù)目）減小，是二倍體的33％，同時(shí)保衛(wèi)細(xì)胞內(nèi)葉綠體數(shù)明顯增多。通過方差分析，氣孔大小及密度差異達(dá)到極顯著水平。通過對(duì)蘭州百合多倍體植株和二倍體植株根尖染色體計(jì)數(shù)發(fā)現(xiàn)，二倍體植株所有細(xì)胞染色體數(shù)為2n=2x=24，而多倍體植株中有的細(xì)胞染色體數(shù)為2n=2x=24，而有些細(xì)胞染色體數(shù)