纈沙坦對(duì)糖尿病腎病作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察纈沙坦對(duì)高糖環(huán)境下系膜細(xì)胞氧化應(yīng)激水平的影響，研究纈沙坦對(duì)高糖刺激后系膜細(xì)胞基質(zhì)沉積的影響，初步探討纈沙坦對(duì)糖尿病腎病作用的機(jī)制。 方法：1、高糖體外培養(yǎng)系膜細(xì)胞，不同濃度纈沙坦干預(yù)，以RT-PCR方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)NADPH氧化酶亞基p22<'phox>的mRNA表達(dá)的變化，并以DCFH-DA和HE標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS表達(dá)改變，觀察纈沙坦對(duì)高糖刺激后系膜細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平的影響。2、不同

2、濃度纈沙坦作用高糖體外培養(yǎng)系膜細(xì)胞，選取纖維連接蛋白(FN)、纖溶酶原激活物抑制劑-1(PAI-1)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2)、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子-2(TIMP-2)反映基質(zhì)合成和降解，RT-PCR方法檢測(cè)；選取細(xì)胞外基質(zhì)重要相關(guān)因子轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β<,1>(TGF-β<,1>)，ELISA方法檢測(cè)，觀察纈沙坦對(duì)高糖下系膜細(xì)胞基質(zhì)沉積的影響。 結(jié)果：1、高糖作用2天時(shí)，NADPH氧化酶亞基p22<'phox>的mRNA表

3、達(dá)無明顯變化，纈沙坦對(duì)其無影響，高糖作用5天后，p22<'phox>的mRNA表達(dá)增加，纈沙坦對(duì)高糖引起系膜細(xì)胞p22<'phox>的mRNA表達(dá)增加有下調(diào)作用，具濃度依賴性；高糖分別作用2天、5天的系膜細(xì)胞內(nèi)，超氧陰離子(O<,2><'->)與過氧化氫(H<,2>O<,2>)隨著時(shí)間延長(zhǎng)，升高愈加明顯，纈沙坦對(duì)其均具有下調(diào)作用，并呈濃度依賴性。2、纈沙坦能夠以濃度依賴關(guān)系抑制不同作用時(shí)間下高糖引起系膜細(xì)胞FN、PAI-1、TIMP-2