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1、 本文通過兩步層析分離法對食蚊魚(Gmbusiaaffinis)卵黃脂蛋白(Lv)進行分離純化。凝膠層析采用Sephacryls-300柱，在FPLC上進行分離洗脫。一共出現(xiàn)五個洗脫峰，對各峰樣品濃縮后進行電泳分析，第三峰中蛋白含量最高，經(jīng)鑒定為Lv，收集后離心濃縮上DEAE-cellulose陰離子交換柱，經(jīng)過0.1～1MNaCl梯度洗脫，得到純化的Lv。以純化后的Lv作為抗原，注射免疫制備兔抗Lv抗血清并建立起了間接競爭酶聯(lián)免疫吸
2、附反應(yīng)(ELISA)方法來檢測雄魚體內(nèi)卵黃蛋白原(Vtg)的含量，經(jīng)PAGE電泳以及Westernblotting分析，制備的抗Lv抗血清與純化的Lv有交叉反應(yīng)，抗血清具有良好的特異性。該ELISA方法最低檢測濃度為62.5ng/ml，工作范圍為62.5～1000ng/ml。研究結(jié)果顯示，通過對室內(nèi)和野外水體原位暴露的比較，食蚊魚Vtg的間接競爭ELISA檢測法可以作為一種靈敏有效的環(huán)境激素檢測方法，應(yīng)用于野外水環(huán)境污染物的調(diào)查和初步分
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