肝細(xì)胞肝癌中HIF-1、VEGF的表達(dá)及EGCG抑制肝癌細(xì)胞增殖作用的研究.pdf

1、第一部分肝細(xì)胞肝:癌中HIF-1、VEGF的相關(guān)表達(dá)研究目的:缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia-inducible factor 1,HIF-1)是廣泛存在于哺乳動物體內(nèi)的一種轉(zhuǎn)錄因子,缺氧狀態(tài)下可以調(diào)節(jié)多種靶基因如血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)等的表達(dá).在腫瘤的缺氧反應(yīng)過程中轉(zhuǎn)錄因子HIF-1起著中樞紐帶的作用.HIF-l是一種由α、β亞基組成的異二聚體,HIF-1

2、α是HIF-1的特異性活性調(diào)節(jié)亞基,缺氧刺激下HIF-l α的表達(dá)水平增加,與HIF-1 β亞基形成穩(wěn)定的二聚體,在共活化因子(如CBP、P300等)協(xié)助下,結(jié)合至靶基因的缺氧反應(yīng)元件(hypoxia responsive element,HRE),上調(diào)靶基因的表達(dá).HIF-1 α亞基的氨基酸401-603區(qū)域?yàn)檠跻蕾囆越到鈪^(qū)(oxygen-dependent degradation domain,ODD).常氧狀態(tài)下,HIF-1 α蛋

3、白通過ODD區(qū)域在VHL蛋白介導(dǎo)下被泛素化,被蛋白酶迅速降解(半衰期<5分鐘).隨著氧濃度的降低,HIF-1 α蛋白降解過程被抑制,蛋白水平呈指數(shù)增長.VEGF是HIF-1的重要靶基因之一.缺氧時(shí)VEGF的轉(zhuǎn)錄和mRNA的穩(wěn)定性均有增加.HIF-1通過與VEGF基因缺氧反應(yīng)元件(5'-TACGTG-GC-3')結(jié)合,上調(diào)其轉(zhuǎn)錄.并且缺氧下RNA結(jié)合蛋白與VEGF的mRNA 3'端富含A、U的序列結(jié)合,阻斷mRNA降解.研究肝細(xì)胞肝癌缺氧

4、反應(yīng)下,HIF-1和VEGF的相關(guān)表達(dá)變化,旨在探討其在肝細(xì)胞肝癌發(fā)生、發(fā)展中的作用,及其相互調(diào)控機(jī)制.結(jié)論HIF-1 α和VEGF在肝細(xì)胞肝癌的缺氧反應(yīng)中占據(jù)重要地位,缺氧狀態(tài)下HIF-1 α蛋白含量提高,形成活性HIF-1,上調(diào)靶基因VEGF的表達(dá),參與腫瘤的血管生成和發(fā)生發(fā)展過程.第二部分EGCG對肝細(xì)胞肝癌的增殖抑制作用和對缺氧反應(yīng)的影響目的:綠茶含有多種茶多酚,其中含量最高的成分是:表沒食子兒茶素沒食子酸酯(epirigall

5、ocatechin-3-gallate,EGCG).EGCG主要有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗病毒、抗突變和抗腫瘤形成等生物學(xué)活性和藥理效應(yīng).研究發(fā)現(xiàn)EGCG可誘導(dǎo)多種腫瘤細(xì)胞包括肺癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞等的凋亡;可以通過阻滯腫瘤細(xì)胞的生長周期而抑制其生長;并且可以抑制蛋白酪氨酸激酶的活性,從而使某些酪氨酸蛋白不能磷酸化,抑制細(xì)胞生長.尿激酶是腫瘤生長的關(guān)鍵酶,腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移需要尿激酶等蛋白水解酶的參與,EGCG可與尿激酶結(jié)合,干擾

6、尿激酶與底物結(jié)合,從而抑制酶活性.EGCG還可以通過調(diào)節(jié)體內(nèi)一些與癌變有關(guān)的酶如鳥氨酸脫羧酶(ODC)、超氧化物岐化酶(SOD)等的活性達(dá)到抑制癌基因的表達(dá);抑制某些化學(xué)致癌物如亞硝酸鹽、二甲肼、黃曲霉素等強(qiáng)烈的化學(xué)致癌物對癌癥的誘發(fā)作用;提高機(jī)體的免疫功能,刺激人外周血單核細(xì)胞產(chǎn)生IL-1和TNF,從而發(fā)揮抗癌作用.該課題的研究目的就在于研究EGCG是否可以抑制肝細(xì)胞肝癌的增殖,以及探討EGCG對腫瘤細(xì)胞缺氧反應(yīng)的作用及作用機(jī)制.結(jié)論