農(nóng)桿菌介導(dǎo)的NPK1基因轉(zhuǎn)化辣椒的研究.pdf

1、辣椒(Capsicum annuum L．)是一種很重要的蔬菜作物，既可直接生食，也可以作為調(diào)味品，具有豐富的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟(jì)價值，廣泛栽培于世界各地。但由于惡劣的自然環(huán)境的影響和近年來病蟲害的頻繁發(fā)生，大大降低了辣椒的產(chǎn)量和品質(zhì)。因此，關(guān)于如何提高辣椒的抗逆、抗病性的研究工作已成為重要的科技課題。隨著分子生物學(xué)的不斷深入，辣椒育種工作的方式方法也逐漸變得更加多樣和成熟。煙草的．NPK1基因是參與細(xì)胞周期調(diào)控的MAPKKK激酶，在植物的生

2、長發(fā)育調(diào)節(jié)和抗逆等生理過程中起重要作用。本試驗試圖通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法把NPK1基因?qū)肜苯分?，旨在建立和?yōu)化農(nóng)桿菌介導(dǎo)辣椒遺傳轉(zhuǎn)化技術(shù)，為研究辣椒基因功能奠定基礎(chǔ)。 以9個辣椒(Capsicum annuum L.)品種為材料，對辣椒高頻再生體系的建立進(jìn)行了系統(tǒng)研究與比較分析。并以其中3個再生能力好的品種為試材，對影響農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的諸因素、再生植株篩選與鑒定方面進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究分析。在此基礎(chǔ)上，以辣椒子葉為外植體，通

3、過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法將NPK1基因?qū)肜苯?，獲得轉(zhuǎn)基因再生植株。其主要結(jié)果如下： 1.不同辣椒品種的再生能力差別較大，其中以品種B17、P41和P54的分化能力最強(qiáng)；辣椒植株離體再生體系中，較高的6-BA/IAA值有利于辣椒外植體的分化再生，而6-BA/IAA值較低則適合于再生芽的伸長；辣椒子葉和帶柄子葉的再生能力比下胚軸強(qiáng)，是較好的外植體材料；不同苗齡的子葉再生能力也有差異，以12-16d苗齡的外植體為好；高頻率的不定芽

4、分化培養(yǎng)基為MS無機(jī)成分+B5有機(jī)成分+0.5mg/L LAA+5.0mg/L6-BA；不定芽伸長的適宜培養(yǎng)基為MS無機(jī)成分+B5有機(jī)成分+0.5mg/LAA+1.5mg/L6-BA+2.0m/LGA3；高效生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS無機(jī)成分+B5有機(jī)成分+0.2mg/L IAA+0.1m/L NAA。 2.農(nóng)桿菌介導(dǎo)辣椒遺傳轉(zhuǎn)化的適宜條件是：切取14d苗齡子葉外植體，在MS無機(jī)鹽成分+B5有機(jī)成分+0.5mg/L IAA+5.0mg

5、/L 6-BA的瓊脂培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2d后，浸沒于農(nóng)桿菌菌液中侵染8-10min，共培養(yǎng)于MS無機(jī)鹽成分+B5有機(jī)成分+0.5mg/LIAA+5.0mg/L 6-BA上2d后，轉(zhuǎn)移至延遲培養(yǎng)基MB+0.5mg/L IAA+5.0mg/L 6-BA+250mg/L Cef延遲選擇2d，隨后轉(zhuǎn)移至MB+0.5mg/LLAA+5.0mg/L 6-BA+250mg/LCef+50mg/L Km進(jìn)行選擇培養(yǎng)。 3.試驗共獲得抗性植株48株，