冬凌草甲素誘導(dǎo)C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡的初步研究.pdf

1、目的:
　　 1、研究不同濃度冬凌草甲素處理C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞后對細(xì)胞生長抑制和凋亡產(chǎn)生的影響。
　　 2、研究用Hoechst33258染色觀察冬凌草甲素對C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞凋亡產(chǎn)生的影響。
　　 3、研究冬凌草甲素處理C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞后對C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞表達(dá)Bcl-2、Bax和caspase-3蛋白的影響。
　　 方法:
　　 1、采用CCK-8法檢測不同濃度的冬凌草甲素(0、2.5、5、10、2

2、0、40和80μmol/L)分別作用0、6、24、48和72小時(shí)后C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞生長抑制情況。
　　 2、采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測不同濃度的冬凌草甲素(0、2.5、5、10、20、40和80μmol/L)作用C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞24小時(shí)后的凋亡情況。
　　 3、采用Hoechst33258染色，熒光顯微鏡下觀察在0、20μmol/L冬凌草甲素作用24小時(shí)后，C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞形態(tài)的改變。
　　 4、采用Western b

3、lot方法檢測在20μmol/L冬凌草甲素作用下0、6、24、48、72小時(shí)后，C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞Bax、Bcl-2和caspase-3蛋白表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:
　　 1、CCK-8法檢測示:冬凌草甲素對C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖的抑制是一種時(shí)間及濃度依賴模式，隨著藥物濃度的增加或作用時(shí)間的延長，抑制率逐漸增加。
　　 2、Annexin V-FITC/流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞調(diào)亡示:隨著冬凌草甲素濃度的增加，C6腦膠質(zhì)

4、瘤細(xì)胞的調(diào)亡率也增加。
　　 3、熒光顯微鏡(Hoechst33258染色法)發(fā)現(xiàn)，在20μmol/L冬凌草甲素作用下24小時(shí)，C6腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞出現(xiàn)了細(xì)胞凋亡形態(tài)學(xué)改變，調(diào)亡細(xì)胞的細(xì)胞核呈致密濃染，或呈碎塊狀。
　　 4、Western blot方法檢測顯示:在20μmol/L冬凌草甲素作用下， Bax和caspase-3蛋白表達(dá)增強(qiáng)，并隨著時(shí)間的延長而增強(qiáng)，Bcl-2蛋白的表達(dá)減弱，并隨著時(shí)間的延長而減弱。