熊果酸對肝星狀細胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、研究背景：肝纖維化是肝臟對各種原因所致肝損傷的創(chuàng)傷愈合反應(yīng)，是各種慢性肝病共有的病理基礎(chǔ)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，肝星狀細胞(hepatic stellate cell,HSC)在肝纖維化形成過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用，是肝纖維化時細胞外基質(zhì)(ECM)的主要來源細胞。各種致病因素作用下引起肝損傷，通過旁分泌或自分泌釋放多種細胞因子，使肝星狀細胞激活，激活的HSC合成和分泌ECM增加；在肝纖維化逆轉(zhuǎn)過程中，持續(xù)的HSC凋亡發(fā)揮重要作用。因此，抑制肝星狀細

2、胞激活、誘導(dǎo)其凋亡為肝纖維化的治療提供了新的方法。本研究在進行抗肝纖維化藥物篩選時發(fā)現(xiàn)熊果酸(Ursolic acid,UA)具有抗肝纖維化作用，本研究通過觀察熊果酸對肝星狀細胞增殖和凋亡的影響，初步探討熊果酸抗肝纖維化可能的作用機制。 目的：觀察熊果酸對肝星狀細胞增殖與凋亡的影響；觀察熊果酸對肝星狀細胞中Bcl-2,Bax和Caspase3蛋白表達的影響，旨在探討熊果酸誘導(dǎo)肝星狀細胞凋亡的可能作用機制。 方法：將不同濃

3、度熊果酸(25μM、50μM、75μM、100μM、125μM和150μM)作用于肝星狀細胞(HSC-T6)及肝細胞(LO2)，分別在藥物作用24h、48h、72h后采用MMT法觀察熊果酸對HSC-T6及LO2細胞增殖的影響；采用流式細胞術(shù)檢測熊果酸對HSC-T6凋亡的影響；光鏡觀察熊果酸作用后細胞形態(tài)學(xué)變化；通過免疫細胞化學(xué)術(shù)檢測HSC-T6中Bcl-2,Bax，和Caspase3蛋白的表達。 結(jié)果： ①MTT法檢測顯

4、示：25μM、50μM、75μM、100μM、125μM和150μM熊果酸均可以抑制HSC-T6細胞的增殖，且隨藥物濃度增加及作用時間延長，生長抑制率逐漸升高。 ②熊果酸濃度為25μM、50μM、75μM時可促進LO2細胞增殖，但是，當熊果酸濃度大于100μM時表現(xiàn)出抑制LO2細胞增殖。 ③HE染色顯示：熊果酸作用HSC-T6細胞48h后，光鏡下可見細胞縮小變圓，核濃縮等。 ④流式細胞儀檢測顯示：25μM、50μ

5、M、75μM熊果酸作用HSC-T6細胞48h后，細胞凋亡率分別為(10.30±3.85)％，(21.87±4.46)％，(31.33±6.18)％，比對照組(2.93±1.60)％明顯升高(P＜0.01)。 ⑤免疫細胞化學(xué)結(jié)果顯示：25μM、50μM、75μM熊果酸作用HSC-T6細胞48小時后，Bax及Caspase3蛋白表達較對照組升高(P＜0.05)，且呈劑量依賴性，而Bcl-2蛋白表達與對照組無明顯差異(P＞0.05)。

6、 結(jié)論： ①熊果酸在體外可以較明顯的抑制HSC-T6細胞的增殖、誘導(dǎo)HSC-T6細胞凋亡，作用強度呈劑量-時間依賴。 ②熊果酸對LO2細胞的生長具有雙向調(diào)節(jié)作用，低濃度促進增殖，高濃度(≥100μM)抑制LO2細胞增殖。 ③熊果酸可以上調(diào)HSC-T6細胞Bax、Caspase3蛋白表達，但對Bcl-2蛋白無明顯影響。 ④熊果酸誘導(dǎo)HSC-T6細胞凋亡的機理可能是通過上調(diào)Bax蛋白，降低Bcl-2/