TSA對水牛體細(xì)胞增殖及核移植胚胎發(fā)育影響的研究.pdf

1、探討了組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA對水牛成纖維細(xì)胞增殖和Cx43基因表達(dá)的影響。傳代培養(yǎng)六代的水牛成纖維細(xì)胞用不同濃度的TSA處理不同時間，采用MTT法對水牛成纖維細(xì)胞增殖情況進行檢測，并用實時熒光定量PCR技術(shù)對水牛成纖維細(xì)胞的Cx43mRNA變化情況進行檢測。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，TSA處理對水牛成纖維細(xì)胞增殖有明顯的抑制作用，且呈時間、濃度依賴性；適宜濃度TSA處理水牛成纖維細(xì)胞一定時間可以顯著提高Cx43基因的表達(dá)水平，且隨處理濃度、時間的

2、不同出現(xiàn)動態(tài)變化，當(dāng)TSA處理時間為48h，處理濃度為0.1、0.5、1μmol/L時，Cx43 tuRNA的表達(dá)量分別約是對照組的7倍、9倍、11倍，顯著高于對照組(P<0.05)。 探討了組蛋白去乙?；敢种苿㏕SA處理水牛體細(xì)胞核移植胚胎對其隨后發(fā)育能力的影響。用不同濃度的TSA(0 nmol/L、5 nmol/L、50 nmol/L、100 nmol/L)處理核移植重構(gòu)胚10h，各組間的核移植胚胎分裂率無顯著差異(P>0

3、.05)，當(dāng)TSA處理濃度為50 nmol/L時，重構(gòu)胚的囊胚發(fā)育率顯著高于對照組(22.0％Vs 13.0％，P<0.05)。濃度為50 nmol/L的TSA處理核移植重構(gòu)胚不同時間(0、10、24、36、48h)，核移植胚胎的分裂率各組間無顯著差異(P>0.05)；但TSA處理時間為10、24、36、48h的處理組其囊胚發(fā)育率均顯著高于對照組(P<0.05)，然而各處理組之間囊胚率并無顯著差異(P>0.05)，其中TSA處理時間為2

4、4h組重構(gòu)胚的囊胚發(fā)育率較高(26.4％)。結(jié)果顯示，50nmol/L的TSA處理水牛體細(xì)胞核移植重構(gòu)胚24h，能顯著提高水牛體細(xì)胞核移植效果。 采用免疫熒光染色技術(shù)測定了間隙連接蛋白Cx43在水牛體外受精(IVF)胚胎和體細(xì)胞核移植(SCNT)胚胎早期發(fā)育過程中的表達(dá)模式。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，Cx43蛋白在胚胎發(fā)育的各個時期均有表達(dá)，其中在2、4、8細(xì)胞期，Cx43蛋白在兩種類型胚胎的卵裂球中均有大量表達(dá)，而在桑椹胚和囊胚期，Cx43蛋

5、白的表達(dá)明顯減弱，且體細(xì)胞核移植胚胎中Cx43蛋白的表達(dá)明顯弱于同時期的體外受精胚胎。 以上研究結(jié)果表明：(1)TSA處理對水牛成纖維細(xì)胞增殖有抑制作用，并呈時間、濃度依賴性；(2)適宜濃度TSA處理水牛成纖維細(xì)胞一定時間可以顯著提高Cx43基因的表達(dá)水平；(3)適宜濃度的TSA處理水牛體細(xì)胞核移植重構(gòu)胚一定時間可以提高其胚胎發(fā)育能力；(4)Cx43蛋白在早期胚胎發(fā)育中起著重要的作用，水牛核移植胚胎的Cx43蛋白表達(dá)量低可能是其