樹莓離體快繁體系建立及葉片不定芽誘導(dǎo)研究.pdf

1、本研究分別以樹莓‘Chilliwack’、‘Dinkum’、‘Kotata’和‘Shawnee’的頂芽和莖段為外植體，通過初代培養(yǎng)、繼代增殖和生根培養(yǎng)，建立起樹莓離體快繁體系。在此基礎(chǔ)上，通過正交試驗設(shè)計并結(jié)合方差分析和多重比較，探討了基因型、基本培養(yǎng)基、不同種類的生長素和細(xì)胞分裂素、暗培養(yǎng)以及AgNO3對樹莓葉片不定芽再生的影響。試驗結(jié)果如下： (1)外植體建立階段：四個品種中‘Kotata’的外植體成活率最高，為48.29％

2、，其次是‘Shawnee’(41.73％)，這兩個品種的最高成活率都出現(xiàn)在MS+BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L+GA30.5mg/L(2＃)上?！瓹hilliwack’和‘Dinkum’最高成活率分別為31.1％和21.53％，且最高成活率都出現(xiàn)在MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L(1＃)上。說明以MS為基本培養(yǎng)基附加BA(1.0mg/L～2.0mg/L)和較低濃度的mA(0.2mg/L)的培養(yǎng)基有利于樹莓無菌材料

3、的建立。 (2)增殖階段：MS+BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L對‘Chilliwack’而言是最合適的增殖培養(yǎng)基。1/2MS+BA1.0mg/L+IBA0.4mg/L是‘Dinkum’最合適的增殖培養(yǎng)基。對‘Kotata’和‘Shawnee’來說，MS+BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L是最佳的增殖培養(yǎng)基。 (3)生根階段：‘Kotata’的生根效果優(yōu)于其它三個品種；1/4MS的生根效果明顯地好于其它三個

4、培養(yǎng)基；蔗糖是生根培養(yǎng)基中必需的；生長素和AC在生根前期是必需的，但在后期可有可無。 (4)在所選定的四個樹莓品種進行葉片不定芽誘導(dǎo)時發(fā)現(xiàn)，‘Chilliwack’表現(xiàn)出最高的再生力，‘Kotata’次之，‘Dinkum’和‘Shawnee’沒有不定芽發(fā)生?！瓹hilliwack’在所選用的32個組合中，在NN69+BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L組合上，不定芽誘導(dǎo)率最高(49.67％)，且質(zhì)量最好?！甂otata’在N

5、N69+BA2.0mg/L+IBA0.2mg/L組合上，不定芽誘導(dǎo)率達(dá)12.13％，質(zhì)量最好。 (5)通過對TDZ和BA兩種細(xì)胞分裂素在樹莓葉片不定芽再生上的誘導(dǎo)結(jié)果進行多重比較和方差分析發(fā)現(xiàn)，BA的誘導(dǎo)效果優(yōu)于TDZ。 (6)通過比較QL、WPM、NN69、MS四種基本培養(yǎng)基對樹莓葉片不定芽再生的影響后發(fā)現(xiàn)，高鹽濃度、高N含量的MS基本培養(yǎng)基有利于不定芽的再生，‘Chilliwack’葉片不定芽再生率為64.13％，‘

6、Kotata’的再生率為23.21％，較NN69上的再生率分別提高15.44％和11.07％。其余兩種基本培養(yǎng)基都會導(dǎo)致‘Chilliwack’和‘Kotata’葉片不定芽再生率的明顯降低。 (7)暗培養(yǎng)對樹莓葉片不定芽誘導(dǎo)有顯著的促進效果。暗培養(yǎng)14d可將‘Chilliwack’不定芽再生率由62.00％提高到83.32％，‘Kotata’不定芽再生率提高了11.87％，但隨著暗培養(yǎng)時間延長，葉片不定芽再生率下降。 (

7、8)0.5mg/L～2.0mg/LAgNO3的加入抑制了‘Chilliwack’和‘Kotata’葉片不定芽的再生，且隨著濃度的增加，對不定芽的再生抑制作用越明顯，‘Chilliwack’不定芽再生率由0.0mg/LAgNO3時的61.17％下降到2.0mg/LAgNO3時的9.98％?！甂otata’葉片的再生率也由0.0mg/LAgNO3時的22.10％下降到2.0mg/LAgNO3時的7.42％。但AgNO3改變了樹莓不定芽的再生