耐藥革蘭陽(yáng)性球菌感染病原基因診斷研究.pdf

1、該課題在分析臨床常見病原菌共有的23S rRNA基因以及革蘭陽(yáng)性球菌主要耐藥基因的基礎(chǔ)上,建立了可用于檢測(cè)耐藥革蘭陽(yáng)性球菌的快速基因診斷方法,有望為臨床重癥感染的早期病原診斷和及時(shí)正確的抗感染提供客觀依據(jù).第一部分:臨床常見病原菌分子生物學(xué)鑒定方法研究.核糖體核糖核酸(ribosomal RNA,rRNA)基因?yàn)樗猩矬w生存所必需的基因序列并且也是較保守的序列.細(xì)菌的rRNA基因由5S、16S以及23S rRNA基因三部分構(gòu)成.其中基

2、因序列均含有保守區(qū)和多變區(qū),多變區(qū)序列在不同種類細(xì)菌中各不相同,可提供區(qū)分不同細(xì)菌的重要信息,故多變區(qū)的序列可用于細(xì)菌的進(jìn)一步區(qū)分和鑒定;利用基因序列保守區(qū)可設(shè)計(jì)通用引物,使同時(shí)擴(kuò)增、檢測(cè)多種細(xì)菌成為可能,以往應(yīng)用16S rRNA基因檢測(cè)細(xì)菌較多,近年來(lái)23S rRNA基因的應(yīng)用有所增多.故該研究為明確23S rRNA基因用于臨床常見致病菌鑒定的可行性,首先利用多變區(qū)兩端保守序列設(shè)計(jì)的一對(duì)通用引物,對(duì)13種臨床常見致病菌的23S rRN

3、A基因部分序列進(jìn)行了擴(kuò)增及測(cè)序,序列采用DNAStar軟件進(jìn)行分析.第二部分:耐藥革蘭陽(yáng)性球菌主要耐藥基因檢測(cè)方法研究.耐甲氧西林葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococci,MRS)、耐萬(wàn)古霉素腸球菌(vancomycin-resistant enterococci,VRE)以及青霉素不敏感肺炎鏈球菌(penicillin nonsusceptible Steptococcus pneumoniae

4、,PNSSP)是目前臨床上最重要的耐藥革蘭陽(yáng)性球菌,建立快速、特異、靈敏的檢測(cè)方法對(duì)這類細(xì)菌所致感染的診治具有重要意義.這些耐藥菌的耐藥機(jī)制已基本明確,由于mecA、vanA與vanB分別是MRS與VRE的耐藥決定基因,上述基因的檢出可以確定被測(cè)細(xì)菌為相應(yīng)的耐藥菌,故我們首先分析了mecA與vanA、vanB的基因序列,分別設(shè)計(jì)了mecA基因的特異性引物和vanA、vanB兩種基因的通用引物,建立了可擴(kuò)增mecA與vanA/B的PCR檢

5、測(cè)方法;PNSSP的耐藥機(jī)制與上述2類耐藥有所不同,是由于編碼PBPs的基因,其中主要是PBP2b基因發(fā)生變異,它們的編碼產(chǎn)物與青霉素的親和力下降,從而導(dǎo)致肺炎鏈球菌對(duì)青霉素耐藥.第三部分:耐藥革蘭陽(yáng)性球菌感染病原基因診斷方法的建立與應(yīng)用研究.由于耐藥菌所致嚴(yán)重感染的快速診斷對(duì)疾病的診治至關(guān)重要,而常規(guī)方法因耗時(shí)較長(zhǎng)常常難以滿足臨床救治危重病患的需要,建立靈敏、快速的檢測(cè)方法是目前亟待解決的課題,故我們?cè)谇皟刹糠盅芯康幕A(chǔ)上,就建立以P