模擬糞便標本中單增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan雙重Real-time PCR檢測方法及初步應用性評價.pdf

1、目的：建立一種TaqMan雙重Real-time PCR方法，用于模擬糞便標本中單增李斯特菌和伊氏李斯特菌的快速檢測。
　　方法：以單增李斯特菌特異基因hly和伊氏李斯特菌特異基因smcL作為靶基因，合成2對引物和其相應的熒光探針，優(yōu)化各個反應組分的濃度和實時熒光PCR循環(huán)程序，制作標準曲線，建立從模擬糞便中直接檢測單增李斯特菌和伊氏李斯特菌的TaqMan雙重Real-time PCR方法。利用李斯特菌屬中其它種李斯特菌及常見致病

2、菌驗證引物、探針的特異性；通過制備模擬糞便標本并對其進行二次增菌后，分別提取 DNA，采用 TaqMan雙重Real-time PCR進行檢測，以達到快速檢測單增李斯特菌和伊氏李斯特菌的目的。
　　結果：采用本研究建立的TaqMan雙重Real-time PCR方法對模擬糞便標本的檢測結果顯示特異性良好，與其他種李斯特菌和其他病原茵均無交叉反應。模擬糞便中檢測靈敏度分別為2.45×103CFU/g和2.92×103CFU/g；模擬

3、糞便標本在3h內可得出檢測結果，當模擬糞便標本中單增李斯特菌含量為6CFU/g和伊氏李斯特菌含量為5CFU/g時，經(jīng)過增菌后使用雙重Real-time PCR方法可檢測出陽性結果。
　　結論：本研究建立了以單增李斯特菌的特異基因 hly和伊氏李斯特菌的特異基因smcL為靶基因的TaqMan雙重Real-time PCR檢測方法，該方法具有特異性好、敏感性高、快速易操作等優(yōu)點，可用于臨床、食品及環(huán)境標本的快速診斷，以及我國人群中單增