沙眼衣原體E型DNA疫苗的構(gòu)建及其免疫效果的研究.pdf

1、沙眼衣原體(Chlamydiatrachomatis,C.t)所致的泌尿生殖道感染近幾年迅速增多，無癥狀和慢性C.t感染所致的前列腺炎、不孕不育、異位妊娠、慢性盆腔炎等嚴(yán)重危害著患者的身心健康。目前，C.t泌尿生殖道感染的遷延難治、易于復(fù)發(fā)和耗資巨大已成為共識，對C.t感染的研究已成為當(dāng)今國內(nèi)外研究的熱點之一，C.t的預(yù)防和控制方法亟待改進。沙眼衣原體疫苗的研究便是預(yù)防措施中的重點之一。在眾多研究的C.t疫苗中，DNA疫苗憑借其不可比擬

2、的優(yōu)勢成為發(fā)展的方向。遺憾的是到目前為止仍然沒有成功的疫苗問世。 目的：構(gòu)建感染泌尿生殖道的C.t優(yōu)勢型-E型的DNA疫苗，并選擇小鼠白細(xì)胞介素2(mouseinterleukin-2，mIL-2)真核表達質(zhì)粒作為免疫佐劑，研究DNA疫苗單獨免疫及聯(lián)合佐劑共同免疫在小鼠體內(nèi)誘發(fā)的免疫應(yīng)答和免疫保護作用。 方法：C.tE型經(jīng)細(xì)胞培養(yǎng)后提取染色體DNA作為模板，設(shè)計引物擴增出完整的omp1基因，并將該基因定向克隆到真核表達載

3、體pcDNA3.1(+)中構(gòu)建重組質(zhì)粒(即DNA疫苗)，鑒定后脂質(zhì)體法轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒至HeLa細(xì)胞中表達。以BALB/c小鼠為實驗動物，采用肌肉接種免疫的方式，將小鼠分為接種空質(zhì)粒的陰性對照組、DNA疫苗單獨免疫組、DNA疫苗聯(lián)合mIL-2基因佐劑免疫組和接種滅活C.tE型原體的陽性對照組。通過血清和生殖道局部抗體檢測、細(xì)胞因子檢測、抗體中和試驗、遲發(fā)型超敏反應(yīng)、脾淋巴細(xì)胞增殖試驗、實驗動物經(jīng)生殖道途徑進行C.tE型攻擊后的C.t清除情況

4、以及局部組織病理形態(tài)學(xué)變化的觀察來研究所構(gòu)建的C.tE型DNA疫苗的免疫效應(yīng)和mIL-2基因佐劑的免疫增效作用。 結(jié)果：(1)C.tE型omp1基因DNA疫苗構(gòu)建成功，并在HeLa細(xì)胞中得到表達。(2)構(gòu)建的C.tE型DNA疫苗單獨免疫小鼠能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生一定的C.t特異性細(xì)胞免疫和體液免疫，其中細(xì)胞免疫水平更顯著，以Th1反應(yīng)占優(yōu)勢，對C.tE型生殖道的攻擊具有保護作用。(3)mIL-2基因佐劑能夠明顯增強C.tE型DNA疫苗所誘

5、導(dǎo)的細(xì)胞免疫反應(yīng)，而且Th1優(yōu)勢更明顯，對C.tE型生殖道的攻擊同樣具有保護作用。 結(jié)論：(1)C.tE型omp1基因DNA疫苗成功構(gòu)建，能夠為后續(xù)的動物實驗所使用。(2)實驗動物針對C.tomp1基因所編碼的主要外膜蛋白產(chǎn)生的抗體是保護性抗體，具有中和能力。(3)構(gòu)建的C.tE型DNA疫苗能夠在實驗小鼠體內(nèi)發(fā)揮一定的免疫保護作用。(4)mIL-2真核表達質(zhì)粒是C.tDNA疫苗有效的免疫佐劑，能夠產(chǎn)生滿意的免疫增效作用，可作為今