拮抗放線菌FX-H-51的篩選及其活性物質的研究.pdf

1、本研究從土壤中分離、篩選出對多種植物病原真菌具有良好拮抗作用的放線菌，最終獲得一株對禾谷絲核菌具有高效抑制活性的拮抗放線菌FX-H-51菌株。對該菌株進行鑒定，液態(tài)發(fā)酵條件優(yōu)化，并以不同的分離純化方法純化抑菌活性物質。主要研究結果如下：
　　1、放線菌的分離對采自山西、陜西、甘肅黃土高原地區(qū)的蘋果根際土壤20余份、山東麥田根際土壤30余份樣品，室內(nèi)進行自然干燥等預處理后，采用平板稀釋法，高氏1號培養(yǎng)基中加80 mg/L的重鉻酸鉀進

2、行放線菌的選擇性分離，共分離得到217株放線菌。
　　2、高抑菌活性菌株的篩選以禾谷絲核菌（ Rhizoctonia cerealis）、平臍蠕孢菌（Bipolaris sorokiniana）、黃色鐮孢菌（Fusarium culmorum）為靶標菌，采用平板對峙法、灰色關聯(lián)度分析法進行拮抗菌的篩選，利用平板對峙法篩選出抑菌效果較好的4株放線菌 FX-H-51、FX-H-71、FX-S-114、FX-S-178；利用灰色關聯(lián)度分

3、析法對這4株菌株的生防效果及耐受性狀進行綜合評價，證明放線菌菌株FX-H-51綜合評價指標最好，不僅對病原真菌的有較好的抑制作用，而且對不利的生長環(huán)境有良好的耐受性。
　　3、放線菌分類地位鑒定對FX-H-51菌株進行形態(tài)和培養(yǎng)特征觀察、生理生化特性測定以及16SrDNA序列分析確定其分類地位。其形態(tài)特征、培養(yǎng)特征均與鏈霉菌屬一致；16SrDNA全序列共有1447 bp，與GenBank數(shù)據(jù)庫中相關序列比對，F(xiàn)X-H-51菌株與海

4、棠鏈霉菌（Streptomyces spectabilis）的同源性為99％，系統(tǒng)發(fā)育樹中親緣關系最近。由于FX-H-51菌株的生理生化特征與海棠鏈霉菌（Streptomyces spectabilis）存在一定的差異，初步鑒定FX-H-51菌株為海棠鏈霉菌的變種。
　　4、發(fā)酵條件的優(yōu)化利用單因子試驗和正交試驗相結合的手段，對FX-H-51菌株發(fā)酵條件進行優(yōu)化。結果表明，在液體培養(yǎng)基主要成分為麥芽糖50.3 g、胰蛋白胨9.6

5、g、NaCl2.5 g、CaCO32.0 g、蒸餾水1000 ml時，最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)條件是100 ml裝液量、200r/min、pH8.0、28℃培養(yǎng)7 d。
　　5、發(fā)酵產(chǎn)物穩(wěn)定性測定為了了解FX-H-51菌株產(chǎn)生抑菌活性物質的理化性質，對其發(fā)酵產(chǎn)物進行穩(wěn)定性試驗。結果表明，抑菌活性物質在室溫和低溫時熱穩(wěn)定性良好；在pH值3.0～11.0的條件下性質比較穩(wěn)定；在紫外線處理45 min后仍具有較高的抑菌活性。
　　6、發(fā)酵液粗