急性白血病RNA轉(zhuǎn)染臍血源性樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)的免疫作用.pdf

1、目的：近年來急性白血病(AL)的治療，主要是化療、骨髓或外周血造血干細(xì)胞移植，可使其5年生存率明顯提高，但化療后獲得完全緩解的病人仍有體內(nèi)殘留白血病灶引起AL復(fù)發(fā)，因而清除殘留白血病病灶仍是困擾治愈AL的一大難題。我們利用多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)臍帶血產(chǎn)生大量的樹突狀細(xì)胞(DC)，并以急性白血病RNA轉(zhuǎn)染臍血源性DC，誘導(dǎo)抗白血病特異性細(xì)胞毒T細(xì)胞(CTL)的產(chǎn)生，為清除AL患者體內(nèi)殘留灶提供積極有效的免疫學(xué)方法。 方法：取AL患者外周

2、血或骨髓血，以Ficoll淋巴細(xì)胞分離液獲得單個核細(xì)胞(MNC)，作為提取自體白血病靶細(xì)胞以及白血病mRNA之用，并以Trizol試劑法提取RNA。分離臍血MNC，以2×106個細(xì)胞/孔接種于12孔培養(yǎng)板，培養(yǎng)體系中加入重組人粒單核細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)，重組人白細(xì)胞介素4(rhIL-4)和腫瘤壞死因子α(TNF-α)，并在培養(yǎng)第5天，加入白血病mRNA，致敏臍血DC。培養(yǎng)過程中，倒置顯微鏡觀察樹突狀細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀(

3、FCM)檢測細(xì)胞免疫表型。培養(yǎng)第12天收獲成熟DC，與自體T淋巴細(xì)胞共培養(yǎng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生白血病特異性CTL，乳酸脫氫酶法(LDH法)測定該CTL溶靶細(xì)胞活性。 結(jié)果：對所得RNA進(jìn)行定性分析，驗證急性白血病RNA的存在。臍血來源MNC經(jīng)上述因子培養(yǎng)后，表現(xiàn)出成熟DC典型形態(tài)和免疫表型特征，培養(yǎng)第5天，DC相關(guān)分化抗原CD1a、CD83、CD86、CD80的表達(dá)較培養(yǎng)前增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)；培養(yǎng)至第12天，DC相關(guān)

4、分化抗原CD1a、CD83、CD86、CD80的表達(dá)較培養(yǎng)第5天增高，另外HLA-DR的表達(dá)也較培養(yǎng)第5天增高，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。以白血病RNA轉(zhuǎn)染的DC組所刺激的自體T淋巴細(xì)胞對自身白血病靶細(xì)胞顯示出明顯的殺傷活性，而未經(jīng)抗原轉(zhuǎn)染DC組無明顯殺傷活性，按照各效靶比進(jìn)行兩者的比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。隨著效靶比的逐漸增大，溶解靶細(xì)胞率隨之增大。當(dāng)效靶比增大到100：1時，效應(yīng)細(xì)胞對自身白血病靶細(xì)胞的