豬圓環(huán)病毒1型Cap蛋白的原核表達及PCV-1-PCV-2抗體鑒別ELISA的建立.pdf

1、豬圓環(huán)病毒(Porcinecircovirus,PCV)是目前已知最小的動物病毒。根據(jù)PCV的致病性、抗原性及核菅酸序列，將其分為PCV-1和PCV-2兩型。PCV-1廣泛存在于豬體內(nèi)及豬源傳代細胞系中，經(jīng)動物感染試驗證明PCV-1無致病性，但與豬的健康密切相關(guān)，因此對該病原的研究十分必要。PCV-2與豬群中發(fā)生的多種疾病相關(guān)，如斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征、豬皮炎腎病綜合征、豬呼吸道疾病綜合征及先天性震顫等，給全世界養(yǎng)豬業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟

2、損失。 本試驗通過設(shè)計合成特異性引物，擴增PCV-1ORF2基因并進行原核表達，用所獲得的Cap重組蛋白經(jīng)純化后作為包被抗原建立了一種敏感、特異、穩(wěn)定性好的間接ELISA方法。 根據(jù)GenBank公布的PCV-1ORF2基因序列，設(shè)計并合成三對特異性引物，以PCV-1為模板經(jīng)PCR擴增出三個ORF2基因片段，將其克隆到pMD18-T載體中。經(jīng)過測序，將三段ORF2基因定向克隆至原核表達載體pGEX-6P-1上，然后轉(zhuǎn)入表

3、達宿主菌BL21中，獲得了目的蛋白，分子量分別約為41Ku、40Ku、38Ku。通過Westernblot證明這三種重組蛋白均具有抗原性。 選用抗原性最好的且不與PCV-2標準陽性血清發(fā)生交叉反應(yīng)的CapB重組蛋白作為包被抗原，通過優(yōu)化反應(yīng)條件建立了能檢測血清中PCV-1抗體的間接ELISA。此外，用CapB蛋白和實驗室已制備的PCV-2的Cap蛋白同時作為包被抗原，建立了一種能鑒別PCV-1和PCV-2的間接ELISA。用以上