大豆抗氧化肽酶法制備及其活性保護(hù)技術(shù)研究.pdf

1、大豆活性肽由于其高效的營養(yǎng)價(jià)值及功能活性，是目前營養(yǎng)界研究得比較多的一個(gè)熱門課題，而且對這方面的研究也具有很實(shí)際的經(jīng)濟(jì)和利用價(jià)值。本試驗(yàn)通過比較六種不同的蛋白酶對大豆分離蛋白的水解效果，篩選出最適合生產(chǎn)抗氧化肽的Alcalase堿性蛋白酶，用正交實(shí)驗(yàn)法確定了其水解大豆分離蛋白的最佳工藝條件為：底物濃度7.0％、酶用量9000U/g底物、溫度52.5℃、pH值8.5、反應(yīng)時(shí)間5h。在上述條件下，蛋白質(zhì)水解度為24.28％、氮溶指數(shù)95.7

2、％。蛋白質(zhì)含量43.5mg/mL，蛋白回收率71.2％。分別從羥基自由基(OH·)除能力、超氧陰離子自由基(O2-·)清除能力、抑制脂質(zhì)過氧化(ROO·)能力這三方面研究水解產(chǎn)物的抗氧化活性，水解5h的產(chǎn)物OH·抑制率為36.43％、清除O2-·活性為317.73U/g、ROO·抑制率為46.24％。 采用超濾法對得到的水解產(chǎn)物分離，用截留分子量5000D、2000D的超濾膜將水解產(chǎn)物分成分子量大于5000D、5000D～200

3、0D和小于2000D三種組分，然后比較這三種組分的抗氧化活性。結(jié)果顯示，分子量小于2000D的組分抗氧化活性最強(qiáng)。因此試驗(yàn)選擇截流分子量為2000D的超濾膜對大豆分離蛋白的水解產(chǎn)物進(jìn)行分離純化。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，以膜滲透通量為響應(yīng)值設(shè)計(jì)了4因素(壓力、pH值、溫度、時(shí)間)3水平的響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)，通過響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)得到最佳超濾條件為：壓力0.24MPa、pH值7.47、溫度44.8℃、時(shí)間109.6min。在此條件下平均膜滲透通量為28.62

4、L/(m2h)。超濾后其抗氧化活性得到了提高，清除O2-·活性由超濾前317.73U/g升高至超濾后387.9U/g。 得到的活性較高的大豆抗氧化肽，用微膠囊化的方法對其活性進(jìn)行保護(hù)。試驗(yàn)采用了復(fù)凝聚法和復(fù)相乳化法制各大豆抗氧化肽微球。復(fù)凝聚法的最佳制備工藝為：殼聚糖濃度0.8％，阿拉伯膠與芯材肽的比8:1，成囊溫度45℃，成囊pH4.75。得到的微囊包埋率為64.0％，載藥量11.78％。復(fù)相乳化法制備微球最佳工藝是：2.5％