2006年山東省豬“高熱病”病理學(xué)觀察及病原分離鑒定.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome，PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)引起不同日齡、性別和品種的豬的一種高度接觸性傳染病。主要以引起母豬繁殖障礙及仔豬和生長豬出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)疾病和較高的死亡率為特征，自1987年首次在美國暴發(fā)，目前已遍布全球主要養(yǎng)豬國家。近年來隨著集約化養(yǎng)豬規(guī)模的不斷擴(kuò)大，PRRSV對(duì)養(yǎng)豬業(yè)構(gòu)成了較大的威脅，對(duì)世界養(yǎng)豬業(yè)造成了災(zāi)難性的經(jīng)濟(jì)損

2、失。 本研究主要為弄清2006年山東省大部分地區(qū)暴發(fā)的一種以高熱、高致病性和高死亡率為特征的豬“高熱病”的病因。對(duì)山東各地送檢的15例19頭豬“高熱病”典型病例進(jìn)行臨床病理剖檢和病理組織學(xué)觀察，用PCR或RT-PCR方法就豬瘟病毒(CSFV)、豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)、豬Ⅱ型圓環(huán)病毒(PCV-2)、偽狂犬病毒(PRV)及弓形蟲進(jìn)行分子生物學(xué)診斷，同時(shí)進(jìn)行細(xì)菌分離培養(yǎng)。結(jié)果顯示19頭病豬均出現(xiàn)間質(zhì)性肺炎、病毒性腦炎、全

3、身性淋巴組織急性壞死以及不同程度的實(shí)質(zhì)器官變性壞死。9頭病豬表現(xiàn)卡他性或出血性卡他性胃腸炎。19頭病豬PRRSV、PCV-2、CSFV的檢出率分別為100％、21.2％、10.5％，73.7％的病例能分離到大腸桿菌、葡萄球菌、鏈球菌以及支原體等，病豬器官免疫組化染色顯示PRRSV在肺和扁桃體等組織中呈強(qiáng)陽性反應(yīng)。這提示PRRSV才是2006年山東省豬“高熱病”的主導(dǎo)致病原，同時(shí)又有多種病原參與。 利用Marc-145細(xì)胞，從RT

4、-PCR檢測(cè)為陽性的“高熱病”病豬除菌肺臟中分離出1株P(guān)RRSV，命名為SD-14。病料接種Marc-145細(xì)胞后，第二代開始出現(xiàn)明顯的細(xì)胞病變。從其第4代分離毒株中提取RNA，用PRRSV的特異性引物可擴(kuò)增目的片斷。將Marc-145細(xì)胞傳代于24孔細(xì)胞培養(yǎng)板，測(cè)得第四代分離毒的TCID50為10-6.5/0.1mL。間接免疫熒光技術(shù)檢測(cè)結(jié)果表明，接毒后36h可于胞漿內(nèi)檢測(cè)到特異性熒光。收集80％出現(xiàn)病變后的接毒細(xì)胞制作超薄切片，投射

5、電鏡下可觀察到大約70nm的典型病毒粒子。 對(duì)PRRSV極易發(fā)生變異的完整的Nsp2及ORF5基因組核酸序列擴(kuò)增，并進(jìn)行測(cè)序。應(yīng)用DNAStar軟件分析所測(cè)序列，并與PRRSV國內(nèi)外毒株JXA1，HEB1，HnNh1，GD，LN，SHH，CH-1a，S1、HB-1、HB-2、美洲型VR-2332株相應(yīng)基因組序列進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果顯示SD14株與同時(shí)期分離自不同地區(qū)高熱病毒株的Nsp2、ORF5基因氨基酸同源性分別達(dá)到98.3％-98