水曲柳體胚發(fā)生技術(shù)優(yōu)化及H2O2和NO作用分析.pdf

1、水曲柳(F.mandshurica Rupr.)屬木犀科白蠟樹(shù)屬，是東北3大硬闊葉樹(shù)種之一。本文以水曲柳成熟合子胚為外植體，通過(guò)研究外源H2O2和NO對(duì)水曲柳體胚發(fā)生的影響及對(duì)細(xì)胞內(nèi)總死亡量、細(xì)胞內(nèi)H2O2含量和細(xì)胞內(nèi)NO含量的影響，分析其在水曲柳體胚發(fā)生和外植體細(xì)胞死亡中的作用，探究其在信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中的位置;同時(shí)篩選進(jìn)行水曲柳體胚增殖和萌發(fā)培養(yǎng)的材料，然后以胚性愈傷組織為繼代材料研究成功誘導(dǎo)體胚以后繼代次數(shù)對(duì)體胚增殖和植株再生的影響，分析

2、水曲柳體胚繼代過(guò)程中的胚性保持能力和植株再生能力，為進(jìn)行水曲柳種質(zhì)資源保存提供保障。主要研究結(jié)果如下：
　　1.H2O2和NO在水曲柳體胚發(fā)生中均起著重要的作用。適當(dāng)增加外植體細(xì)胞內(nèi)H2O2含量促進(jìn)體胚發(fā)生;清除外植體細(xì)胞中H2O2不利于體胚發(fā)生和后期發(fā)育。增加外植體細(xì)胞內(nèi)NO含量有利于體胚發(fā)生和發(fā)育，提高體胚質(zhì)量;減少外植體細(xì)胞中NO含量不利于水曲柳體胚發(fā)生和發(fā)育，降低體胚質(zhì)量。
　　2.水曲柳體胚增殖培養(yǎng)過(guò)程中，4 mm

3、未變綠體胚的直接增殖效果最好。相比直接增殖材料，進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)的最佳材料為愈傷組織。水曲柳體胚增殖系數(shù)隨增殖繼代次數(shù)的增加而增加。
　　3.水曲柳體胚萌發(fā)培養(yǎng)過(guò)程中，4～8mm未變綠體胚的萌發(fā)效果最佳。隨著增殖繼代次數(shù)的增加，水曲柳次生體胚的體胚萌發(fā)率逐漸降低;隨著萌發(fā)培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，體胚均出現(xiàn)大量的褐化死亡現(xiàn)象。隨著增殖繼代次數(shù)的增加，水曲柳次生體胚的體胚生根率呈現(xiàn)先升高后降低的趨勢(shì)。
　　4.H2O2和NO作為信號(hào)因子

4、共同參與了高濃度蔗糖脅迫誘導(dǎo)的水曲柳體胚發(fā)生過(guò)程中的外植體細(xì)胞死亡過(guò)程，NO在信號(hào)網(wǎng)絡(luò)中作為H2O2的上游信號(hào)。H2O2處理抑制細(xì)胞總死亡量，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)H2O2含量的生成，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)NO含量的生成;CAT處理抑制細(xì)胞總死亡量，抑制細(xì)胞內(nèi)H2O2含量的生成，抑制細(xì)胞內(nèi)NO的生成。
　　5.SNP處理抑制水曲柳外植體細(xì)胞死亡，抑制細(xì)胞內(nèi)H2O2的產(chǎn)生，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)NO的產(chǎn)生;PTIO抑制細(xì)胞死亡，抑制細(xì)胞內(nèi)H2O2的產(chǎn)生，抑制細(xì)胞內(nèi)NO