液相串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)血清25羥維生素D的方法建立和臨床應(yīng)用.pdf

1、隨著全球的臨床醫(yī)生們意識(shí)到維生素D缺乏的危害性，檢測(cè)不同人群的維生素D水平的樣本量已越來(lái)越多。25羥維生素D(25(OH)D)主要包括肝臟代謝的25羥維生素D3和25羥維生素D2兩種產(chǎn)物，是評(píng)估機(jī)體維生素D狀態(tài)的直接指標(biāo)。目前主要使用免疫學(xué)的方法檢測(cè)血清25(OH)D，但這類方法由于抗體的交叉反應(yīng)以及不能等效的識(shí)別維生素D3和D2，導(dǎo)致檢測(cè)的特異性、準(zhǔn)確性和靈敏度都受到限制。采用液相串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)能夠有效的避免免疫學(xué)方法

2、面臨的各種技術(shù)問(wèn)題，能夠靈敏且特異的測(cè)定血清中的25(OH)D濃度。
　　本文首先使用液相串聯(lián)質(zhì)譜分析儀建立了樣本固相萃取—液相分離—質(zhì)譜分析的檢測(cè)血清25(OH)D的新方法，此方法能夠特異性的檢測(cè)出血清樣本中的25(OH)D2和25(OH)D3濃度。參照美國(guó)FDA的生物分析方法驗(yàn)證導(dǎo)則標(biāo)準(zhǔn)對(duì)所建方法進(jìn)行基本性能驗(yàn)證:①25(OH)D2和25(OH)D3的檢測(cè)線性范圍為6.25～500 nmol/L。②25(OH)D2和25(OH

3、)D3的定量檢出限分別為2.5和1.25 nmol/L。③批內(nèi)、批間的CV分別＜4％和＜6％。④回收率結(jié)果為93.26～112.16％。⑤DEQAS室間質(zhì)評(píng)結(jié)果偏倚＜10％。結(jié)果表明所建立的LC-MS/MS基本性能符合評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)，能夠靈敏且準(zhǔn)確的檢測(cè)出血清中25(OH)D2和25(OH)D3的濃度。
　　使用目前常用的3種檢測(cè)25(OH)D的電化學(xué)發(fā)光法(ECLIA)、微粒子酶免法(MEIA)和酶聯(lián)免疫吸附發(fā)(ELISA)的免疫學(xué)方

4、法與LC-MS/MS同時(shí)檢測(cè)190份健康體檢的血清樣本，比較各種方法與LC-MS/MS的檢測(cè)結(jié)果一致性。結(jié)果顯示:①ECLIA、MEIA、ELISA與LC-MS/MS的相關(guān)系數(shù)分別為0.79、0.69、0.56。②ECLIA、MEIA、ELISA的25(OH)D2識(shí)別反應(yīng)率分別為42.42％、24.05％、9.22％。③隨著25(OH)D2含量％的增加，3種方法均產(chǎn)生明顯的負(fù)偏倚。結(jié)果表明免疫學(xué)方法檢測(cè)25(OH)D的結(jié)果準(zhǔn)確性尚存在問(wèn)

5、題，尤其是在個(gè)體補(bǔ)充維生素D2的情況下會(huì)明顯低估25(OH)D的檢測(cè)結(jié)果。
　　檢測(cè)271例臨床確診為丙型肝炎患者和218例表面健康人的血清25(OH)D濃度，測(cè)定丙肝組的病毒載量(HCVRNA)，并計(jì)算肝臟纖維化指數(shù)(Fibrotest)。比較丙肝組與健康對(duì)照組間25(OH)D濃度水平的差異，分析丙肝組病毒載量、肝臟纖維化指數(shù)(Fibrotest)與25(OH)D濃度的關(guān)系。結(jié)果顯示:①丙肝組和健康對(duì)照組的25(OH)D濃度均值

6、分別為49.31±1.39nmol/L VS60.42±1.34 nmol/L，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。②丙肝組的25(OH)D缺乏(＜50nmol/L)和嚴(yán)重缺乏(＜25nmol/L)的比例為41.33％(112/271)和14.4％(39/271)，明顯高于健康對(duì)照組的27.98％(61/218)和3.67％(8/218)，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)。③病毒載量和Fibrotest值的高低與25(OH)D濃度無(wú)明顯相