豬流行性腹瀉病毒HBMC-2012株的致病性與免疫研究.pdf

1、豬流行性腹瀉(PED)是由豬流行性腹瀉病毒(PEDV)引起豬的一種高度接觸性的急性腸道傳染病，主要以嘔吐、水樣腹瀉和脫水為特征。2010年以來，我國多個地區(qū)突然爆發(fā)由PEDV變異株引起的初生仔豬腹瀉，其臨床癥狀、發(fā)病率和死亡率均較此前常見的PED嚴(yán)重，給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前對PEDV的致病性與免疫特征了解不夠深入，缺乏標(biāo)準(zhǔn)防控程序，本研究旨在探索PEDV流行毒株與宿主間的感染免疫特性，為進(jìn)一步闡明該病的發(fā)病機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

2、r>　　用自河北省某豬場分離的PEDV HBMC/2012株分別感染3日齡和21日齡健康仔豬，評價該毒株的致病性。3日齡仔豬感染后2-3 d(dpi)出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉和嘔吐等典型癥狀，持續(xù)3d左右逐漸好轉(zhuǎn)，感染后8h即可在肛拭子中檢測到病毒，并一直持續(xù)到實(shí)驗(yàn)結(jié)束(13d)。剖檢可見小腸壁變薄，腸絨毛脫落或增粗，內(nèi)充滿淡黃色內(nèi)容物，部分小腸內(nèi)充滿氣體，腸系膜淋巴結(jié)出血。21日齡仔豬的臨床表現(xiàn)較3日齡仔豬輕，感染后2d出現(xiàn)不同程度的腹瀉，沒有

3、出現(xiàn)嘔吐癥狀，病理變化也較輕。感染后3、7d在血清和腸道內(nèi)可檢測到病毒核酸，感染后23 d在相應(yīng)樣品內(nèi)未檢測到。免疫組化檢測發(fā)現(xiàn)PEDV主要分布在小腸的中后段，小腸絨毛上皮細(xì)胞內(nèi)的病毒檢出率最高。該結(jié)果表明PEDV HBMC/2012毒株具有明顯的致病性，其所致疾病的嚴(yán)重程度與日齡密切相關(guān)。
　　進(jìn)而通過流式細(xì)胞術(shù)、ELISA和免疫組化等手段，評價PEDV感染21日齡仔豬的全身和局部免疫反應(yīng)及相關(guān)免疫分子的變化。感染后19 d(d

4、pi)仔豬體內(nèi)的抗體水平達(dá)到高峰，感染早期(3 dpi)，外周血淋巴細(xì)胞(PBMC)的特異增殖能力有所提高，CD3+CD4+CD8-Th、CD3+CD4-CD8+ Tc、CD3+CD4-CD8-γδT和CD3-CD4-CD8+細(xì)胞亞群的含量顯著增加;7 dpi，CD3-CD4-CD8+細(xì)胞顯著低于對照組，CD3+CD4+CD8-Th、CD3+CD4-CD8+Tc細(xì)胞含量回落，與對照組無顯著差異，而CD3+CD4-CD8-γδ T的含量仍

5、然極顯著高于對照組。感染后3d，感染組CD3+CD4+CD8+ Tm細(xì)胞亞群含量顯著低于空白對照組，而感染后7d高于空白對照組，但兩組差異不顯著。該結(jié)果提示PEDV能夠誘導(dǎo)機(jī)體特異性免疫應(yīng)答，不同T細(xì)胞亞群參與了免疫應(yīng)答。
　　PEDV感染仔豬的十二指腸、空腸、回腸、盲腸、結(jié)腸與腸系膜淋巴結(jié)等局部組織中的肥大細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞以及SWC1a+或/和SWC8+的粒細(xì)胞增多，杯狀細(xì)胞分泌MUC2的功能明顯下降，但是腸系膜淋巴結(jié)細(xì)胞的