TLR4在C3H-HeJ小鼠軍團(tuán)菌感染模型中的作用.pdf

1、目的：
　　 1．建立軍團(tuán)菌感染的小鼠模型，探討TLR4與軍團(tuán)菌感染的關(guān)系。
　　 2．通過(guò)比較TLR4蛋白及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)，初步闡明TLR4在軍團(tuán)菌感染中的作用機(jī)制。
　　 方法：
　　 1．TLR4基因突變型小鼠C3H/HeJ小鼠、C3H/HeN小鼠作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，6-8周，每組8只，雌雄各半。設(shè)立C3H/HeJ染菌組、C3H/HeN染菌組、C3H/HeN對(duì)照組三個(gè)實(shí)驗(yàn)組。C3H/H

2、eN對(duì)照組作為C3H/HeJ染菌組、C3H/HeN染菌組的共同對(duì)照組。染菌組氣管注射50ul1.2x107cfu/ml軍團(tuán)菌菌懸液，對(duì)照組氣管注射50ul無(wú)菌生理鹽水，分別于染菌后12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)處死小鼠。
　　 2．處死小鼠前采集眼眶血約2ml，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組PBMCTLR4蛋白的表達(dá)量，分析三組各時(shí)間點(diǎn)TLR4蛋白表達(dá)水平的變化。處死小鼠后，取染菌組和對(duì)照組的小鼠每個(gè)時(shí)間點(diǎn)左肺上葉約0.02g固定

3、做病理切片；
　　 3．將剩余肺組織勻漿，用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)各組肺組織中TNF-α和IL-1β的含量。
　　 結(jié)果：
　　 ①C3H/HeJ小鼠和C3H/HeN小鼠進(jìn)行生存實(shí)驗(yàn)時(shí)，C3H/HeJ小鼠的病死率高于C3H/HeN小鼠，兩組的病死率未發(fā)現(xiàn)差異(x2=0.686，P=0.408)。肺組織病理切片顯示C3H/HeJ和C3H/HeN染菌組均有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)并出現(xiàn)肺泡血管出血現(xiàn)象，對(duì)照組未發(fā)現(xiàn)有炎癥反應(yīng)。C3H

4、/HeJ染菌組、C3H/HeN染菌組和C3H/HeN對(duì)照組之間肺臟臟器系數(shù)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.765，P=0.028），各個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=2.296，P=0.084）分組和時(shí)間點(diǎn)之間交互作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.509，P=0.004）。C3H/HeJ染菌組和C3H/HeN染菌組的臟器系數(shù)均高于C3H/HeN對(duì)照組。
　　 ②三組的TLR4蛋白水平表達(dá)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=10.736，P<0.001）

5、，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=55.034，P<0.001)分組和時(shí)間點(diǎn)之問(wèn)交互作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=8.094，P<0.001)。兩兩比較后，除C3H/HeN染菌組與C3H/HeN對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義外，其余各組間均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。基因突變小鼠C3H/HeJ染菌組TLR4蛋白表達(dá)相對(duì)較低，在24小時(shí)達(dá)到高峰后下降;C3H/HeN染菌組及C3H/HeN對(duì)照組TLR4蛋白表達(dá)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而下降。
　　 ③

6、C3H/HeJ染菌組、C3H/HeN染菌組、C3H/HeN對(duì)照組之問(wèn)TNF-α濃度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=47.215，P<0.001），三組在4個(gè)時(shí)間點(diǎn)的比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=21.373，P<0.001），分組和時(shí)間點(diǎn)之間存在交互作用（F=2.816，P=0.021）。C3H/HeJ染菌組和C3H/HeN染菌組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)TNF-α的分泌水平均高于C3H/HeN對(duì)照組，三組TNF-α濃度均在感染24小時(shí)達(dá)到高峰后開(kāi)始下降。三組肺組

7、織IL-1β濃度差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=64.566，P<0.001），各個(gè)時(shí)間點(diǎn)的比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=13.958，P<0.001），分組和時(shí)間點(diǎn)之問(wèn)的交互作用有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=3.958，P=0.005）。C3H/HeJ染菌組IL-1β的分泌水平均高于另外兩組，C3H/HeJ染菌組和C3H/HeN染菌組的IL-1β濃度均在染菌后24小時(shí)達(dá)到高峰后開(kāi)始下降，C3H/HeN對(duì)照組IL-1β的分泌水平隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而上升。
　

8、　 結(jié)論：
　　 ①C3H/HeJ小鼠和C3H/HeN小鼠進(jìn)行生存實(shí)驗(yàn)病死率沒(méi)有差異，染菌后肺組織均出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，提示二者對(duì)軍團(tuán)菌的易感性相同。
　　 ②C3H/HeN染菌組PBMCTLR4蛋白的表達(dá)水平高于C3H/HeJ染菌組，C3H/HeN染菌組與C3H/HeN對(duì)照組的TLR4蛋白表達(dá)水平?jīng)]有差異，提示TLR4可能未參與軍團(tuán)菌的抗感染作用。C31-/HeJ染菌組TLR4蛋白的表達(dá)水平于染菌24h后達(dá)到高峰，可能是其