盆腔器官脫垂的比較蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、·研究目的
　　 1.應用雙向熒光差異凝膠電泳和質(zhì)譜技術(shù)，建立絕經(jīng)后POP患者與正常女性主骶韌帶的蛋白質(zhì)表達譜，篩選并鑒定POP患者與正常對照之間的差異表達蛋白。
　　 2.分析差異表達蛋白，探討POP發(fā)生的分子機制。
　　 ·材料和方法
　　 1.在絕經(jīng)狀態(tài)、年齡、體重指數(shù)、產(chǎn)次等影響POP發(fā)生的重要因素匹配的前提下，選取5例POP與5例無POP患者的子宮主骶韌帶復合體標本。
　　 2.提取組織

2、總蛋白，普通雙向電泳分離，銀染顯色鑒定蛋白質(zhì)抽提質(zhì)量以及在膠圖上的分布情況，并優(yōu)化實驗方法。
　　 3.熒光染料分別標記POP組、對照組以及內(nèi)標，進行雙向電泳得到雙向熒光差異凝膠圖譜。同時制作制備膠。對膠圖進行匹配和差異分析，篩選出兩組之間|AV.Ratio|>1.5，P<0.05的差異表達蛋白質(zhì)點。
　　 4.將差異蛋白質(zhì)點膠內(nèi)酶解后進行MALDI-TOF質(zhì)譜分析和數(shù)據(jù)庫搜索，鑒定差異表達的蛋白質(zhì)點。
　　 ·

3、實驗結(jié)果
　　 1.提取的組織蛋白經(jīng)定量和普通雙向電泳檢測，蛋白質(zhì)濃度符合實驗要求，在膠圖上分離情況滿意，平均可獲得1224+22個蛋白質(zhì)點。
　　 2.獲得5張雙向熒光差異凝膠電泳膠圖，每張膠圖上共約1111±54個蛋白質(zhì)點，經(jīng)過比較分析篩選出33個差異表達蛋白質(zhì)點，均在POP組下調(diào)，最大下調(diào)比例為8.5倍。
　　 3.質(zhì)譜成功鑒定出12種蛋白，分別是白蛋白、纖維蛋白原、未知蛋白、電子傳遞黃素蛋白、血紅蛋白、載

4、脂蛋白A-I、肌動蛋白、轉(zhuǎn)膠蛋白、絲切蛋白、親環(huán)素A、肌球蛋白、半凝乳素-1。
　　 ·結(jié)論
　　 1.經(jīng)過機械研磨、勻漿以及超聲破碎即可使韌帶組織的提取蛋白質(zhì)濃度和純度基本滿足實驗要求，使用24cm PH3-10非線性膠條可以達到較為理想的蛋白質(zhì)分離效果。雙向電泳可作為篩選POP差異表達蛋白的研究方法。
　　 2.半凝乳素-1和親環(huán)素A在神經(jīng)損傷修復中發(fā)揮重要作用。這兩種蛋白在POP組的下調(diào)說明盆底神經(jīng)損傷可能

5、是POP發(fā)生的病因之一。
　　 3.電子傳遞黃素蛋白的減少與線粒體異常相關，線粒體的異?？杉又鼗颊吲璧捉M織的衰老程度，增加POP發(fā)生的風險。
　　 4.肌動蛋白、轉(zhuǎn)膠蛋白、肌球蛋白和絲切蛋白的下調(diào)可導致細胞骨架異常以及收縮功能異常，使POP患者的盆底支持組織逐漸松弛形成脫垂。
　　 5.載脂蛋白A-I參與PPAR信號通路，對組織纖維化和收縮能力產(chǎn)生影響，可能是POP的發(fā)生機制之一。
　　 6.POP組血紅