不同種絞股藍的RAPD分析及其抑菌作用的研究.pdf

1、以絞股藍葉片為實驗材料,采用高鹽低pH法、改良的CTAB法、改良的SDS法、高鹽沉淀法及簡易法提取基因組DNA,通過紫外分光光度計及瓊脂糖凝膠電泳檢測,表明：5種方法均能提取出絞股藍基因組DNA,提取的DNA產(chǎn)量多少依次是簡易法、高鹽沉淀法、高鹽低pH法、改良SDS法和改良CTAB法,從DNA的產(chǎn)量、質量以及實驗耗時等方面綜合比較,高鹽低pH值法為絞股藍葉片DNA提取的最適方法。 以絞股藍基因組DNA為模板,對RAPD反應的各組

2、成成分進行單因子試驗,研究各成分對RAPD產(chǎn)生影響的大致濃度范圍,在單因子試驗基礎上,以正交組合設計實驗進行絞股藍基因組RAPD反應條件的優(yōu)化,以引物0.6ummol/L、dNTP濃度0.25mmol/L、Mg2+濃度2.0mmol/L、Taq酶用量1.5U、模板濃度50ng為反應條件組合所擴增出的條帶清晰,帶型穩(wěn)定。 在優(yōu)化的反應條件下用不同引物對不同種絞股藍基因組DNA進行RAPD擴增,其中10個引物擴增出穩(wěn)定、清晰、重復性

3、好的條帶,共擴增出66條帶,其中55條表現(xiàn)為多態(tài)性,多態(tài)性百分率為83％,表明實驗材料種間具有豐富的遺傳多態(tài)性,在不同引物擴增下,個別實驗材料產(chǎn)生特異性條帶,這些特異性條帶對于鑒別不同種絞股藍具有一定的價值。將擴增圖譜中清晰、重復性好的條帶賦值后計算了種間的遺傳距離在0.3333～0.7143之間變動,利用UPGMA方法構建遺傳聚類樹狀圖,分析種間的遺傳關系,將實驗所用的5種材料分為3類,五柱絞股藍和疏花絞股藍聚為一類、絞股藍和光葉絞股

4、藍聚為一類,201甘型絞股藍獨為一類,RAPD聚類結果和形態(tài)學分類具有一致性。 取3種類型的絞股藍進行抑菌實驗,對不同細菌的抑制效果三種類型有一定差別,對絞股藍的抑菌物質提取條件篩選,用兩種溶劑對絞股藍進行抑菌組分的提取,水提取物的抑菌效果最佳,將絞股藍粗粉與水1:30混合,超聲處理40min,在60℃下浸提2h,重復提取2次,可將絞股藍中的抑菌成分基本浸提,對絞股藍在最佳浸提條件下浸提的水提取物用乙醇沉淀,得到的沉淀物對本實驗