利福霉素SV高產(chǎn)菌株的選育.pdf

1、利福霉素SV由地中海擬無枝酸菌Amycolatoposis mediterranei產(chǎn)生，在生物合成過程中受芳香族氨基酸、利福霉素芳香前體C<,7>N的結(jié)構(gòu)類似物及利福霉素SV的反饋調(diào)節(jié)。本文根據(jù)利福霉素SV生物合成途徑和代謝調(diào)控理論，對(duì)利福霉素SV的產(chǎn)生菌進(jìn)行了推理選育。原始出發(fā)菌種Amycolatoposis mediterranei 177經(jīng)自然選育和原生質(zhì)體融合分別得到Amycolatoposis mediterranei49和

2、Amycolatoposis mediterranei 174，作為兩株不同的誘變出發(fā)菌株。 選用不同的誘變劑對(duì)誘變出發(fā)菌株進(jìn)行誘變處理，分別經(jīng)過50μg/ml的吖啶黃誘變處理、1％硫酸二乙酯(DES)處理16min、15W的UV照射60s、0.1 mol/ml的HNO<,2>誘變處理5min、0.8mg/ml的亞硝基胍(NTG)處理40min、UV照射40s和0.1 mol/ml的HNo<,2>處理3min復(fù)合誘變以及UV照射

3、40s和1％的DES處理10min復(fù)合誘變，再分別采用0.1％的L-色氨酸、0.5％L-色氨酸、0.1％鄰氨基苯甲酸和0.05％的利福霉素SV進(jìn)行藥物耐受篩選，并結(jié)合自然選育進(jìn)行分離純化，經(jīng)過瓊脂塊初篩以及搖瓶發(fā)酵復(fù)篩，最終獲得利福霉素sv生產(chǎn)菌株Amycolatoposis mediterranei7-35，其搖瓶發(fā)酵單位達(dá)到6518μg/ml，較出發(fā)菌株Amycolatoposis mediterranei49提高了18.5％。

4、 為了充分體現(xiàn)高產(chǎn)菌株Amycolatoposis mediterranei7-35的生產(chǎn)優(yōu)勢(shì)，激發(fā)其產(chǎn)利福霉素SV的潛力，進(jìn)一步對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了調(diào)整和優(yōu)化。選取魚粉、豆餅粉和KNO<,3>三個(gè)因素進(jìn)行單因素以及正交試驗(yàn)，確定其發(fā)酵培養(yǎng)基的最佳組合是魚粉的添加量為0.5％、豆餅粉的添加量為1.2％和KNO<,3>的添加量為0.6％，此條件下利福霉素SV生產(chǎn)菌株Amycolatoposis mediterranei7-35搖瓶發(fā)酵