球孢白僵菌噻唑合成酶基因的克隆和功能分析.pdf

1、西南大學(xué)碩士學(xué)位論文球孢白僵菌噻唑合成酶基因的克隆和功能分析姓名：周群申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：微生物學(xué)指導(dǎo)教師：裴炎20080601西南大學(xué)碩十學(xué)位論文中文摘要蛋白質(zhì)分子量為3525kDa，等電點(diǎn)589。BbTHI中含有一個(gè)噻唑合成酶基因家族共有的ADT(腺苷二磷酸5(伊乙基)4甲基噻唑2羧酸)活性結(jié)合位點(diǎn)。Southem雜交結(jié)果表明，B6碭f在球孢白僵菌基因組中以單拷貝形式存在。3曰6砌f的功能分析31基因敲除利用基因敲除策略，采用農(nóng)

2、桿菌介導(dǎo)的球孢白僵菌遺傳轉(zhuǎn)化方法獲得了3個(gè)敲除召6乃f的缺失突變體，分別命名為厶B6碭f26，厶B6刀if33，厶B6碭弭8。Southem雜交驗(yàn)證表明，外源片段以單拷貝整合到基因組中，3個(gè)突變體均無(wú)隨機(jī)插入突變。32維生素B1含量測(cè)定VBl含量測(cè)定表明，突變體中VBl含量顯著降低。插入突變體M936，同源重組菌株厶曰6乃f26、厶B6乃f33、厶B6碭f48中VBl含量?jī)H為野生型菌株的3474％，3101％，2666％和2728％，而

3、超量表達(dá)B6碭f菌株中vBl含量比野生型菌株高49％。33生物學(xué)分析(1)外源vBl能回復(fù)TDNA插入突變體和同源重組突變體的缺陷表型，使產(chǎn)孢和菌落形態(tài)恢復(fù)正常。(2)敲除曰6碭f降低了球孢白僵菌的產(chǎn)孢量。插入突變體M936，同源重組菌株厶B6乃f26、厶B6砌f33、厶B6砌i48產(chǎn)孢量與野生型菌株相比分別減少了3461％，6694％，6459％和6109％，而超量表達(dá)召6乃f菌株的產(chǎn)孢量與野生型菌株相當(dāng)。(3)敲除B6砌f不影響球孢

4、白僵菌的分生孢子萌發(fā)率。野生型菌株，插入突變體M936，同源重組菌株厶B6砌挖6、厶B6碭f33、厶B6刀l弭8和超量表達(dá)B6刀zf菌株的分生孢子萌發(fā)中時(shí)差異不顯著。34生物測(cè)定敲除B6砌f不影響球孢白僵菌的毒力。在10‘7個(gè)／mL分生孢子濃度下，插入突變體M936，同源重組菌株厶B6碭f26、厶勵(lì)刀lf33、厶B6碭弭8，超量表達(dá)B6碭f菌株對(duì)桃蚜的半致死時(shí)間(LT50)與野生型菌株差異不顯著。上述結(jié)果表明，口6刀lf參與了球孢白僵菌