八棱海棠actin基因的克隆與GO基因轉(zhuǎn)化擬南芥研究.pdf

1、南京農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文八棱海棠actin基因的克隆與GO基因轉(zhuǎn)化擬南芥研究姓名：徐錦濤申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：姚泉洪;章鎮(zhèn)20080601A B S T R A C Tl ——————————————————————————————————————————————————————一T h e C L O N I N G O F 刪C 丁F R O M M a l u s r o b u s t a ．M A N DG

2、E N E T I C T R A N S F O 剛M A T I O N O F G L U C O S EO X I D A S E G E N E F R O M A s p e r g i l l u s n i g e rA B S T R A C TA c t i n i sa u b i q u i t o u s c o m p o n e n t o f t h ep l a n t c y t o s k e l

3、e t o na n d p a r t i c i p a t e si na n u m b e ro fi m p o r t a n t s u b c e l l u l a rp r o c e s s e s ．T h e m i c r o f i l a m e n t c y t o s k e l e t o ni s i n v o l v e d i n c e l ld i v i s i o np l a

4、n el o c a l i z a t i o n ，c e l l e l o n g a t i o na n dc e l l s h a p ed e t e r m i n a t i o n ．T h ep l a n ta c t i n sa r em a d eu po f3 7 6o r 3 7 7a m i n oa c i d sa n d t h e y a r e h i g h l y c o n s e

5、 r v a t i v e ．T h eh i g hc o n s e r v a t i v e n e s sa c c o r d sw i t ht h ea c t i n s a sf u n c t i o no fc y t o s k e l e t o n ．H i g h —q u a l i t yR N Aw a s e x t r a c t e df r o m M a l u sr o b u s t

6、 a s e e d l i n g s ．T h e n t h ee D N A w a s o b t a i n e dt h r o u g h r e v e r s et r a n s c r i p t i o n k i t ．A n a c t i ng e n e w a s o b t m n e d b y r a p i d a m p l i f i c a t i o no f e D N A e n

7、d s ( R A C E )行o m ^ 勿，螂r o b u s t as e e d l i n g s ．S e q u e n c e s a n a l y s i ss h o w e dt h a tt h ea c t i ng e n ei s 113 4b a s ep a i r ( b p ) ．w h i c he n c o d e s3 7 7 a m i n oa c i d s ．S e q u e

8、n c e sa n a l y s i ss h o w e d t h e r ea r eo n l y “v od i 行．e r e n ta m i n oa c i d s b e t w e e nM r A C T a n dA r a b i d o p s i st h a l i a n aa c t i n 7 ．T h e p r e d i c t e di s o e l e c t r i cp o i

9、 n to f t h ep r o t e i ni s 5 ．16 ．W e d e t e c t e d t h a t t h ee x p r e s s i o n o fM r A C T h a d n oo b v i o u s d i 行e r e n c e i nf i v ek i n d so f t i s s u e s t h r o u g h R T - P C R a s s a y s ．T

10、 h e r e s u l td e m o n s t r a t e dm a t A 妃Z 姍r o b u s t aa c t i nb eu s e da si n t e m a ls t a n d a r dt o s t u d ye x p r e s s i o no f o t h e ri n t e r n a lg e n e s i nM a l u s r o b u s t a ．H y d r

11、o g e np e r o x i d e ( H 2 0 2 ) W a so n e o ft h er e a c t i v eo x y g e ns p e c i e s ( R O S ) p r o d u c e dr a p i d l y i n t h e e a r l y s t a g e o fp l a n t —p a t h o g e n i n t e r a c t i o n ．W h

12、e n p l a n t W a s i n f e c t e d b ym i c r o b i a lp a t h o g e n ，H 2 0 2 p l a y e d a ni m p o r t a n t r o l ei nm a n y d e f e n s e r e s p o n s e s t h a tf o l l o w e d ·S o t h ep l a n t ，Sc a p

13、a b i l i t yo f b r o a d ．s p e c t r u mp a t h o g e n - r e s i s t a n c e c o u l db e e n h a n c e d i fH 2 0 2l e v e lW a si m p r o v e db yg e n et r a n s f o r m a t i o nm e t h o d s ．G l u c o s eo x i

14、d a s ec o u l dc a t a l y z et h eo x i d a t i o no fp ．D ．g l u c o s e t o p r o d u c eg l u c o n i c a c i da n dH 2 0 2 ．T h i s e n z y m eh a d b e e nd e t e c t e di ns e v e r a lb a c t e r i aa n d f u n

15、g i ，b u th a d n ’tb e e nf o u n d i na n i m a l sa n d p l a n t s ．I no r d e rt o s t u d yt h e G O g e n em o r ec l e a r l y ，w ec o n s t r u c t e dp l a n tb i n a r yv e c t o r s ．T h e nt h ep l a n tb i

16、n a r y v e c t o r s c o n t a i n i n g t h eG O g e n e w h i c h w a s c o n t r o l l e db yC A M V 3 5 S p r o m o t e r w e r ec o n s t r u c t e d ，t h e y w e r e t r a n s f o r m e d i n t o A r a b i d o p s

17、 i s u s i n g A g r o b a c t e r i u n 。m e d i a t e dt r a n s f o r m a t i o n ．T w e l v et r a n s g e n i cA r a b i d o p s i sp l a n t sw e r e o b t a i n e da f t e ra g r o b a c t e r i u m —m e d i a t e