偽狂犬病毒SA215-T的構(gòu)建與神經(jīng)傳導(dǎo)研究.pdf

1、偽狂犬病毒具有侵染神經(jīng)的能力，利用這一性質(zhì)，該病毒已成功應(yīng)用于對內(nèi)臟、腺體和肌肉的神經(jīng)標(biāo)記。偽狂犬病毒減毒株神經(jīng)傳導(dǎo)是目前較熱門的研究方向。減毒株通常缺失了gE、gI和US9三個基因，其中g(shù)E和gI是偽狂犬病毒重要的毒力基因，缺失后可使宿主的致死時間更長，而US9的功能主要為協(xié)助gB等必需膜蛋白的順行轉(zhuǎn)運，缺失后的病毒在突觸間將執(zhí)行嚴(yán)格的逆向轉(zhuǎn)運。采用Lipofectamine(@)3000轉(zhuǎn)染試劑，將PP63質(zhì)粒與偽狂犬病毒Fa基因組

2、DNA共轉(zhuǎn)染BHK-21細胞，蝕斑篩選gI/gE/Us9重組缺失病毒，并命名為SA215-T。采用PCR、基因測序、western-blot、電鏡檢查和生長曲線測定重組病毒PRV SA215-T。結(jié)果:western-blot未見SA215-T與gE抗體發(fā)生顯色反應(yīng)，其電鏡形態(tài)與野毒無明顯差異，重組病毒與親本毒在細胞中的生長曲線差異不明顯且達到了較高的病毒滴度。
　　為探索三種不同偽狂犬毒株SA215-T，親本毒Fa和Bartha

3、-K61對神經(jīng)的傳導(dǎo)作用，本實驗以小鼠肱二頭肌反射為模型，統(tǒng)計了小鼠攻毒后的存活時間并建立了檢測脊髓偽狂犬病毒分布的免疫組化方法。結(jié)果: Fa小鼠平均存活時間為73.33h，與SA215-T(114.83h)或Bartha-K61(120.67h)差異極顯著(P＜0.01);瀕死小鼠脊髓與大腦經(jīng)PCR和免疫組化檢測，偽狂犬病毒主要位于頸椎C5-C6脊髓并集中分布于脊髓灰質(zhì)運動神經(jīng)元池區(qū)(motorneuron pool)，部分C5-C6