牛蒡子微生物發(fā)酵轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、隨著越來(lái)越多的關(guān)于牛蒡子中主要藥理藥效成分研究報(bào)道表明：牛蒡子中起主要藥效作用的主要成分是牛蒡子苷元。但牛蒡子苷元在牛蒡子中的含量并不高，只有0.19％左右，而作為其前體物質(zhì)的牛蒡子苷含量則達(dá)到3-5％，因此如何提高牛蒡子苷元的含量成為當(dāng)今乃至今后研究的重點(diǎn)。 目前提高牛蒡子中牛蒡子苷元含量的方法有兩種，分別為化學(xué)水解法及酶解法，但兩者均存在一些缺陷，未能應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)。本論文通過(guò)微生物發(fā)酵法實(shí)現(xiàn)對(duì)牛蒡子苷的轉(zhuǎn)化，在轉(zhuǎn)化過(guò)程

2、中即沒(méi)有強(qiáng)烈的酸堿反應(yīng)發(fā)生，又無(wú)需將酶及牛蒡子苷提純，因此有效的避免了上述兩種方法存在的缺陷。 本論文的主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下： Ⅰ、菌種篩選及菌種誘變 根據(jù)牛蒡子苷糖苷鍵類型，結(jié)合微生物篩菌技術(shù)，建立有效的菌株篩選模型。利用建立的篩選模型篩選能夠分泌特異性的作用于牛蒡子苷糖苷鍵的酶的菌株--β-葡萄糖苷酶高產(chǎn)菌。并對(duì)篩選到的菌株進(jìn)行分離、純化，將之命名為HB-2。 Ⅱ、發(fā)酵條件優(yōu)化 以發(fā)酵后牛蒡

3、子苷元含量(％)為指標(biāo)，分別從對(duì)溫度、料水比、裝液量、轉(zhuǎn)速、發(fā)酵時(shí)間等幾方面進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，確定牛蒡子苷轉(zhuǎn)化的最佳發(fā)酵條件，使牛蒡子苷最大程度的轉(zhuǎn)化為牛蒡子苷元。該發(fā)酵條件為：牛蒡子粉粒度20目、發(fā)酵溫度28℃、料水比7.5l:100、裝液量40％、轉(zhuǎn)速200rpm、發(fā)酵時(shí)間120h。 Ⅲ、牛蒡子苷元的分離純化 建立了成熟的從發(fā)酵樣品中分離純化不同純度牛蒡子苷元的分離純化工藝：發(fā)酵液中牛蒡子苷元粗品采用乙酸乙酯萃取的方法獲得，

4、提取率達(dá)到90％以上；發(fā)酵渣中牛蒡子苷元粗品采用乙醇三次回流提取，提取液減壓濃縮至膏狀后用乙酸乙酯溶解洗滌的方法獲得，提取率達(dá)到80％，純度達(dá)到60％左右；再將獲得的牛蒡子苷元粗品采用用硅膠柱層析與重結(jié)晶相結(jié)合的方法分離出牛蒡子苷元精品，該步提取的樣品，純度為95％以上。 IV、牛蒡子苷元的結(jié)構(gòu)鑒定 分別通過(guò)TCL、HPLC、IR、MS、NMR等檢測(cè)方法對(duì)分離所得的樣品進(jìn)行檢測(cè)分析，結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)為：紅外光譜IR(KBr)cm