左旋紫草素通過抑制蛋白酶體活性抗腫瘤作用的體內(nèi)外研究.pdf

1、廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文左旋紫草素通過抑制蛋白酶體活性抗腫瘤作用的體內(nèi)外研究姓名：黃洪標(biāo)申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：劉金保20100601廣州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文左旋紫草素通過抑制蛋白酶體活性抗腫瘤作用的體內(nèi)外研究46molL）作用6小時及相同劑量（2molL）作用不同時間（0－12h）后，裂解細(xì)胞抽提總蛋白測定細(xì)胞蛋白酶體活性，發(fā)現(xiàn)左旋紫草素能明顯抑制P388細(xì)胞內(nèi)蛋白酶體活性，且呈濃度和時間依賴關(guān)系。同等條件下用

2、AnnexinVFITC染色流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞的死亡情況，發(fā)現(xiàn)左旋紫草素誘導(dǎo)P388細(xì)胞死亡呈濃度和時間依賴關(guān)系。抽提總蛋白進(jìn)行westernblot檢測內(nèi)源性蛋白Ub，凋亡相關(guān)蛋白PARP結(jié)果顯示左旋紫草素引起明顯的泛素化蛋白聚集和PARP的切割存在濃度和時間依賴的關(guān)系，且蛋白酶體抑制發(fā)生在細(xì)胞死亡之前。3、左旋紫草素對腹水瘤小鼠生存時間的影響實驗選擇P388腹水瘤昆明小鼠為研究對象，小鼠腹腔接種腫瘤細(xì)胞24小時后開始給予腹腔注射劑量

3、為4mgkg的左旋紫草素，每天一次，持續(xù)給藥7天，觀察小鼠生存時間，連續(xù)觀察60天。結(jié)果顯示4mgkg左旋紫草素能明顯延長P388腹水瘤小鼠生存時間，溶劑對照組在23天內(nèi)小鼠全部死亡，而給藥組第28天死亡一只，其余小鼠都存活到實驗結(jié)束（60天）。4、左旋紫草素對實體瘤小鼠抑瘤作用與其抑制蛋白酶體功能之間的關(guān)系實驗選擇小鼠肝癌細(xì)胞H22實體瘤昆明小鼠為研究對象，小鼠左腋皮下接種腫瘤細(xì)胞24小時后開始給予腹腔注射劑量為4mgkg和8mgkg

4、的左旋紫草素，每天一次，持續(xù)給藥7天，第九天剝?nèi)∧[瘤組織，稱重，提取腫瘤組織總蛋白用westernblot檢測反映UPS系統(tǒng)功能的內(nèi)源性蛋白Ub、Hsp70、IkBa、Bax、P27，同時中性甲醛固定腫瘤組織用免疫組化法檢測P27，TUNEL法檢測腫瘤細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果顯示4mgkg和8mgkg的左旋紫草素能明顯抑制在體腫瘤生長，抑瘤率分別達(dá)到42.4%和55.9%，westernblot檢測顯示給藥組腫瘤組織內(nèi)反映UPS系統(tǒng)功能的Ub